杜兰大学 Uptown 校区的砖楼、树木和校园指示牌。
杜兰大学 Uptown 校区的 Newcomb College Campus,2024 年。(Infrogmation / Wikimedia Commons;CC BY-SA 4.0)

芯片要便于制作,也要能评价血管运输

美国杜兰大学(Tulane University)团队在 Biotechnology Journal 报告一种毫米级无膜器官芯片。研究既考察低成本三维打印模具的可靠性,也检验内部血管是否与侧通道相通、是否形成屏障,以及能否支持颗粒运输和肿瘤血管研究。

模型采用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)和人肺成纤维细胞,置于胶原与纤维蛋白构成的三维环境。芯片内部没有将组织与侧通道隔开的人工多孔膜,血管可以在开放的组织边界形成吻合。

表面性质影响装载,尺寸放大还要经使用者测试

三维打印模具可能弯曲、残留影响固化的成分,表面粗糙也会降低芯片透明度。团队分别处理这些问题,再让至少 6 位熟练程度不同的使用者进行装载测试;成功标准是液体达到出口,同时没有越过导引结构进入中间通道。

在相应表面对比中,平滑芯片的装载成功率为 98% ± 4%,粗糙芯片为 65% ± 11%。进一步扩大组织体积时,装载率从接近 100% 降到约 90%,但该项比较未达到统计学显著。研究据此将表面性质、装载可靠性和组织体积作为不同的评价问题。

作者还比较了单导引与双导引结构。双导引设计在引入压力流后较少发生组织脱离,因而被用于后续模型。继续扩大开放界面时,装载失败增加,显示该设计仍受到几何和表面条件的限制。

形成血管网络之后,还需要确认能够灌流

培养早期可见三维血管组装,第 7 天形成贯穿组织的相连网络。成纤维细胞包绕内皮管道,管道周围出现富含层粘连蛋白的基底膜;模型中没有真正的周细胞,因此这些结构仍按其实际细胞组成描述。

在侧通道形成连续内皮层后,内部血管与外部流体之间出现开放吻合。第 9 天的荧光葡聚糖检测显示液体可进入内部血管;没有侧通道内皮的装置则出现致密边界,内部血管难以从外部进入。网络形态与可灌流性在这里由不同观察支持。

连续流动改善屏障,摇摆培养的结果较不稳定

研究比较了连续单向泵驱动和产生往复流的摇摆培养。泵驱动后,荧光信号较快进入血管,血管外信号只小幅增加;摇摆条件下灌流进入较慢,外部信号逐渐升高,一些装置还出现不完全灌流或明显泄漏。

两组血管的形态测量没有显示显著差异,功能检测却显示了屏障成熟的差别。图中的时间变化来自代表性灌流记录,作者说明至少 3 次独立重复观察到相似结果。

团队随后用纳米颗粒检验运输路径。颗粒分布于血管内外,较大聚集体可滞留在分支附近,较小聚集体可见于血管外。这里直接展示的是颗粒分布及血管运输,并未报告相应纳米药物的治疗反应。

肿瘤材料引起炎症标志变化,形态变化未显著

研究还将一个患者来源、经过异种移植扩增的三阴性乳腺癌模型材料加入血管化组织,形成较致密的肿瘤组织。肿瘤细胞在三维体积中保持存活,Ki67 阳性比例约为 70%;这部分实验包括 3 次生物学重复。

加入肿瘤材料后,内皮细胞中的细胞间黏附分子 1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)信号增加超过 1 个数量级,提示血管炎症激活。血管外观虽更不规则,现有形态指标的比较却未达到统计学显著。

作者将平台的后续用途指向药物和颗粒递送、肿瘤相关血管改变及不同细胞组合的比较。当前研究提供了装载、灌流、屏障与炎症的评价结果;器官特异性细胞、更多肿瘤供者和化疗处理前后的比较仍属于下一步工作。

来源与延伸阅读

  1. Adaptable Manufacturing and Biofabrication of Milliscale Organ Chips With Perfusable Vascular Beds. Biotechnology Journal. 2024. doi:10.1002/biot.202400550 ↗