筛选影响 SFTPC 蛋白稳定性的酶
韩国汉阳大学、江原大学等团队在 Theranostics 研究了肺表面活性蛋白 C（SFTPC）的致病变异。I73T 变异与间质性肺病有关，可造成前体蛋白处理异常和积累；研究希望找到调节这一过程的去泛素化酶。
团队在表达 SFTPC 的 BEAS-2B 细胞中用 CRISPR/Cas9 敲除文库筛选，发现降低 USP11 会减少 SFTPC 蛋白。免疫共沉淀、泛素化和半衰期实验显示，USP11 与 SFTPC 相互作用，并延缓其降解；对 I73T 突变蛋白的稳定作用更明显。
研究随后用基因编辑在人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）中加入 SFTPC-I73T 纯合突变，再与野生型细胞分别诱导肺泡类器官。这样的配对模型用于比较突变本身及降低 USP11 之后的组织表型。
突变类器官出现异常结构和胶原增加
细胞在分化第 21 天经 EpCAM 分选，按每孔 25,000 个细胞聚集，再继续培养形成肺泡类器官。野生型模型呈现带腔的上皮结构；突变模型腔隙较少、排列紊乱，前体 SFTPC 更多出现在细胞膜。
突变模型的胶原染色及 α-SMA、COL1A1 等纤维化相关基因表达增加。降低 USP11 表达后，腔隙面积、胶原沉积和相关分子指标得到改善；胶原凝胶收缩也减弱。
作者解释，突变蛋白异常积累会增加肺泡上皮应激，而 USP11 有助于维持这种积累。降低 USP11 表达后，突变蛋白积累和纤维化样变化同时减轻。
米托蒽醌与 TGF-β 共同处理 48–72 小时
为进一步测试药物作用，团队在野生型和突变肺泡类器官中加入 25 ng/mL TGF-β，诱导纤维化相关变化；另将 6 μM 米托蒽醌与 TGF-β 共同处理 48 或 72 小时。研究把米托蒽醌作为 USP11 抑制剂使用。
与 TGF-β 单独处理相比，共同处理后的突变模型中 USP11、α-SMA、COL1A1 及 vimentin 免疫染色信号降低。COL1A1、α-SMA 和纤维连接蛋白的 mRNA 也减少，胶原凝胶收缩得到缓解。
配套小鼠实验使用博来霉素诱导肺损伤，分别在诱导前及诱导后给米托蒽醌。肺组织染色、纤维化标志和组织评分出现改善，提供了体内模型的补充观察。
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纯合模型用于突出变异效应
研究采用纯合 I73T 细胞，以突出突变蛋白的积累和表型。作者同时指出，临床相关 SFTPC 变异多为杂合；后续计划使用特定突变动物模型，继续检验 USP11 抑制的作用。
这项研究分别检验了 USP11 对突变蛋白稳定性的影响，以及降低 USP11 表达、加入米托蒽醌后类器官组织结构、胶原收缩和分子指标的变化。