10 例患者提供免疫资料，药物实验使用可培养模型
美国 Translational Genomics Research Institute（TGen）与 Baylor University Medical Center 团队在 Frontiers in Immunology 研究自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）产生的细胞外囊泡。团队从肺癌患者获得血液与肿瘤资料，再用肿瘤类器官测试囊泡的直接作用，以及它们对免疫细胞浸润的影响。
队列共 10 例非小细胞肺癌，包括 7 例肺腺癌和 3 例肺鳞癌。血液在肿瘤切除前后采集，单细胞分析有 183,810 个细胞通过过滤；8 份肿瘤组织完成单核 RNA 分析。循环免疫细胞与肿瘤局部组成不同，局部没有明确识别出 NK 细胞群，细胞毒性 T 细胞也较少。
患者之间的 NK 亚群比例不同，分级较高的肿瘤对应的免疫调节型 NK 亚群比例较高。研究将患者 NK 细胞扩增后收集囊泡，囊泡含颗粒酶、穿孔素以及多种 RNA、受体和信号相关蛋白。全转录及蛋白分析分别检出 13,450 个基因和 4,358 种蛋白。
囊泡在顺铂低浓度下增加活力抑制
可获得的患者肿瘤用于形成三维类器官。原图展示 6 个患者模型及 HCC827 细胞系模型的顺铂半数抑制浓度（half-maximal inhibitory concentration，IC50），患者模型范围约为 3.6–44.7 µM，提示供者药敏差异明显。10 例免疫队列、6 个展示药敏的患者模型和细胞系模型具有不同样本范围。
药物测试每孔接种 1,000 个细胞，培养 6 天后加药或囊泡，再过 6 天以 CellTiter-Glo 测量活力。顺铂使用 7 个浓度；与囊泡共同测试时，顺铂浓度为 6.25、12.5、25 µM，囊泡为 10 µg，每个条件 6 个重复。
患者 NK 细胞囊泡在无顺铂或顺铂较低浓度下，使类器官活力降低最多约 40%–45%。健康供者混合 NK 细胞囊泡的同剂量效应较小，未达到统计显著性，患者囊泡通常表现出更强杀伤。术前与术后、自体与异体囊泡之间，未观察到显著的总体效应差别。
HCC827 模型用于减少不同肿瘤供者背景的影响。囊泡杀伤较强时，其来源血液中细胞毒性 NK 与免疫调节型 NK 的比值往往较高，相关拟合 R² 为 0.63。囊泡多种 RNA 和蛋白也与活力变化相关，但这些相关分析尚未确定哪一种成分直接造成杀伤。
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总浸润量变化不显著，细胞组成发生改变
另一组实验把患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）预先接触纳武利尤单抗，再置于类器官上方的 Transwell 中；比较有、无囊泡条件，48 小时后以三维成像和流式检测浸润。实验使用的囊泡剂量为 20 µg，与前述活力实验不同。
加入囊泡后，PBMC 总浸润荧光和类器官大小仅有轻微变化，均未达到统计学显著性。浸润细胞的组成却发生改变：CD4 阳性细胞比例降低，CD56 阳性细胞比例显著提高；CD8 阳性比例的升高没有达到显著性。
HCC827 共培养中，总浸润和细胞亚群的变化也多为趋势，并未出现同样显著的全部结果。直接杀伤较强的囊泡，有时在募集 CD56 阳性细胞方面较弱，反之亦然。研究把细胞死亡和免疫募集视为两个需要分别测试的囊泡功能。
囊泡的杀伤和免疫募集机制还需验证
研究在患者来源及细胞系类器官中，分别检验囊泡的直接杀伤与免疫募集作用。两组实验采用不同的囊泡剂量、观察时间和检测指标；活力变化与浸润亚群比例分别反映两类作用。
研究局限包括患者数量较少、健康供者囊泡采用混合对照，以及结果主要来自体外系统。团队没有分开分析各类囊泡，也没有通过成分干预确定具体杀伤或募集机制。作者提出扩大供者与遗传背景，并补充机制和动物实验，以判断这些体外效应能否支持进一步治疗开发。