用同基因背景对照追踪病变随时间形成
额颞叶痴呆（frontotemporal dementia，FTD）中的部分遗传病例与 MAPT 变异有关。美国西奈山伊坎医学院（Icahn School of Medicine at Mount Sinai）等团队建立人脑类器官，研究 MAPT-V337M 相关的神经元损失之前发生了什么。
模型由 3 位变异携带者的诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）建立，配有同基因背景的校正对照。研究在 2、4 和 6 月龄比较细胞组成、蛋白与转录变化。这个设计把细胞来源差别与变异相关的时间变化分开观察。
整项研究表征了超过 6,000 个类器官，其中整体 RNA 测序最终分析 239 个，单细胞测序分析 339 个。这些是不同实验资料的规模，后续药理成像有独立的神经元和类器官分母。
早期变化先于明显的兴奋性神经元减少
2 月龄时，突变与对照类器官的主要细胞组成相近，但突变模型已有自噬与溶酶体相关异常，部分蛋白指标改变。4 至 6 月龄，总 tau 及部分磷酸化 tau 逐渐积累。
到 6 月龄，突变类器官中的多类兴奋性神经元比例减少。抑制性神经元与星形胶质细胞的数量没有出现同样变化，显示细胞类型之间的易损性存在差别。
这些结果把较早的蛋白稳态和谷氨酸相关变化，与较晚的选择性神经元丢失联系起来。作者提出相应工作模型，但也指出，谷氨酸信号的机制仍需要更完整的电生理验证。
连续追踪神经元，区分基线与兴奋毒性
药理实验用荧光标记的 Synapsin1-GFP 阳性神经元作为观察对象，每日成像追踪同一细胞。实验末以 DRAQ5 染色辅助检查存活状态，统计神经元的存活过程。
在没有过量谷氨酸时，4 月龄突变与对照类器官的神经元生存没有显著差别。图 7B 分别跟踪 80 个神经元，来自各组 5 个类器官。
反复 5 mM 谷氨酸刺激后，突变神经元丢失更快。相应图 7D 各组跟踪 100 个神经元、来自 5 个类器官；跨 3 组同基因背景模型的实验也支持这一易损表型。
apilimod 改善存活，但没有降低 tau
团队选择 PIKFYVE 脂质激酶抑制剂 apilimod，检查内体与溶酶体相关干预能否减轻兴奋毒性。10 μM apilimod 处理后，突变类器官中谷氨酸引起的神经元损失得到改善。
这组存活比较每条件跟踪 120 个神经元，来自 5 个类器官。神经元数用于形成存活曲线，与类器官样本数分别报告；研究使用 Log-rank 检验比较曲线。
apilimod 改善存活时，总 tau 与磷酸化 tau 蛋白水平没有改变。作者提出，药物可能通过内体、溶酶体及受体循环影响兴奋毒性反应。
反义寡核苷酸提供靶点复核，低 4R tau 限制模型范围
研究还用针对 PIKFYVE 的反义寡核苷酸检查靶点作用。突变神经元的生存得到改善，而同基因背景对照神经元未显示同样的显著改善；这为 PIKFYVE 相关干预提供了另一层支持。
原文同时指出，类器官中 4R tau 表达较低，可能遗漏这类蛋白的部分作用。其他 MAPT 变异、散发性 tau 病及小胶质细胞参与的过程，也需要另行检验。