成人组织与多能干细胞的模型来源
2024 年 9 月 12 日，Frontiers in Cell and Developmental Biology 发表肠道类器官标准化与质量评价方法文章。韩国生命工学研究院（Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology，KRIBB）、成均馆大学（Sungkyunkwan University）等机构与企业团队提出从起始细胞到保存后复核的评价建议。
作者讨论两类主要来源：人成体干细胞（human adult stem cells，hASCs）和人多能干细胞（human pluripotent stem cells，hPSCs）。前者通常从成人肠道组织取得，后者经过发育相关分化形成肠道模型。两类模型的形成路径、成熟状态和细胞组成不同。
文章类型为 Methods，汇总了模型建立、质量评价和保存后复核的建议，并以代表性数据展示评价方法。
供者、起始细胞与培养信息
对成人组织来源模型，作者关注供者资料、采样部位、样本状态以及起始细胞是否包含其他细胞类型。成纤维细胞、血管相关细胞或血细胞混入，会影响模型组成与后续测量。
对多能干细胞来源模型，质量信息还包括细胞系身份、多能性及遗传状态。培养基质、培养阶段与传代等信息，也有助于解释不同批次的差异。
两条路径形成的组织并不完全相同。成人组织来源模型主要呈现肠道上皮组成，多能干细胞来源模型还可能包含早期间充质成分。
用形态、细胞标志与组织染色描述模型
文章将形态、细胞组成、基因组稳定性和器官相关功能列为重要质量属性。明场图像可以观察组织形状与培养变化，组织切片与染色则补充结构和黏液相关信息。
作者使用不同标志说明组成评价的思路：LGR5 与 ASCL2 对应肠道干细胞特征，MUC2 对应杯状细胞，VIL1 对应吸收性上皮细胞，CHGA 对应肠内分泌细胞。组合测量有助于辨认模型状态。
代表数据比较培养第 0 天和第 6 天的相关基因表达，并以组织染色与免疫荧光补充。
形态评价还应结合来源和成熟阶段。文中多能干细胞来源模型常见周围间充质及较复杂的芽状结构；成熟模型可进一步检查 KRT20、MUC13 等标志。作者在质量终点部分提出，吸收性上皮细胞比例至少达到 30%，同时核对其他关键细胞类型。
消化酶、转运与屏障功能评价
形态和组成之外，作者建议检查消化酶、转运和屏障等肠道相关功能。乳糖酶、蔗糖酶相关指标与营养物质处理有关，MDR1、PEPT1 等转运蛋白则与物质跨上皮转运联系。
黏液分泌、通透性及离子转运等评价，也能补充模型的功能描述。例如，组织膨胀实验呈现液体或离子转运相关变化。
功能测量需要与相应细胞联系起来：肠碱性磷酸酶反映吸收性上皮细胞特征，黏液染色用于杯状细胞评价；通透性测试和 P-gp/MDR1 转运活性可分别观察屏障与外排功能。模型用于药物吸收或转运研究时，这些结果能够补充单纯的基因表达信息。
STR 身份核验与遗传稳定性分析
短串联重复序列（short tandem repeat，STR）分析用于确认细胞身份，染色体和拷贝数变异（copy number variation，CNV）分析则关注遗传状态。
论文代表图比较原组织与类器官的 CNV 结果，并记录该示例没有检出所列异常片段。
复苏后重新核对活力与模型特征
作者建议在传代期间持续监测模型状态，并在储存、复苏后重新检查活力、细胞组成、身份和相应功能。
文中建议复苏后活力至少达到 50%，并确认组织仍可继续扩增。保存后的检查还涵盖微生物污染、遗传稳定性、基因表达和增殖情况，所选项目需要与类器官类型及具体用途匹配。
持续培养期间，STR 结果应与起始代次匹配。作者也强调记录细胞或组织运输条件及稳定性，并把基质等培养组成纳入模型特征评价，使细胞来源、培养过程和最终检测结果能够对应。