人肿瘤中识别出一类 WNT 抑制相关细胞
卡尔加里大学（University of Calgary）团队整合 5 组人结直肠癌及相关肠组织的单细胞数据，比较肿瘤与正常肠上皮。研究识别出一个较少增殖的肿瘤细胞群，较高表达 NOTUM、NKD1 和 APCDD1 等 WNT 信号抑制相关基因，同时保留部分肠隐窝干细胞相关标志。
团队将其称为 WNT/β-catenin 抑制型癌细胞（WNT/β-catenin inhibitory cancer cells，WICC）。在合并的单细胞数据中，这一表达状态与正常上皮及其他肿瘤细胞群有差别；部分基因在其他细胞中也能检测到，研究依据整体表达特征区分细胞状态。
按患者特征比较，WICC 在部分微卫星稳定（microsatellite stable，MSS）肿瘤中更丰富，并与淋巴结转移相关。较高病理分期的肿瘤中，这组基因的表达也较强；但按每位患者的 WICC 比例比较不同病理分期时，差别未达到统计显著。
8 个类器官检验不同微卫星状态的差别
团队对自行建立的 2 个结肠肿瘤类器官进行单细胞测序，再与公开的 6 个肿瘤类器官及正常肠模型比较。NOTUM、APCDD1 和 NKD1 组成的评分在肿瘤模型中更常见，正常模型中仅占很低比例。
8 个肿瘤模型包含 6 个 MSS 和 2 个微卫星高度不稳定（microsatellite instability-high，MSI-H）模型。5 个 MSS 模型出现较明显的 WNT 抑制相关细胞群，2 个 MSI-H 模型中这类状态很少；剩余 MSS 模型也仅有低比例。
另 2 个肝转移来源模型用于 NOTUM 定量检测，与 2 个结肠肿瘤模型比较。2 个转移模型均有升高趋势，但只有其中 1 个达到统计显著。
细胞状态与免疫浸润、预后相关
在人肿瘤数据中，WICC 丰富的样本通常含较少 CD8/CD4 T 细胞及多种其他免疫效应细胞，并伴有更多成纤维细胞及内皮等间质成分。独立组织验证比较 5 个 MSS 与 5 个 MSI-H 肿瘤，NOTUM 与 CD8A 原位染色呈现不同分布。
在癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）的结肠癌资料中，团队按基因集评分比较患者生存。WICC 富集与较差总体生存相关，但将不同细胞状态联合分组、或进一步按微卫星状态细分时，部分比较未达到显著。患者资料提供关联证据，后续功能试验用于检验免疫作用。
鼠源类器官共培养检验 T 细胞杀伤
功能实验使用具有 Apc、Kras 和 Trp53 相关改变的鼠源肿瘤类器官，并加入能识别模型特定抗原的 CD8 T 细胞。团队先选择性减少 WICC，再比较类器官单培养和 T 细胞共培养的存活与接触情况。
单独减少 WICC 对模型存活影响较小；加入 T 细胞后，结构破坏和死亡染色明显增加。约 72% 的类器官出现超过一半细胞死亡，这个比例的分母为类器官结构，来自 4 次独立实验。
另 3 次独立实验比较 T 细胞在模型表面的分布。减少 WICC 后，表面被 T 细胞覆盖超过一半的类器官比例升高。该指标与死亡染色一起反映共培养中的细胞接触和肿瘤损伤，所用功能模型为鼠源。
NOTUM 补回和缺失模型支持候选免疫机制
在减少 WICC 的共培养中加入重组 NOTUM，更多类器官保留至少一半存活细胞，提示分泌蛋白参与保护作用。团队还建立 Notum 缺失模型；在免疫完整小鼠中，缺失模型生长较慢，且出现较多内源 CD8 T 细胞浸润。
进一步给予相应抗原特异 T 细胞后，Notum 缺失肿瘤在取样终点回缩至未能检出，而保留 Notum 的肿瘤仍持续生长。这项体内比较补充了共培养结果，针对的是特定鼠源模型和人工定义抗原。
在独立 T 细胞实验中，WNT3A 上调部分 WNT 响应基因，加入 NOTUM 后这些变化减弱，包括 TCF7、CCR7 和 BCL2 等与 T 细胞状态有关的基因。作者据此提出，肿瘤分泌的 NOTUM 可能通过局部抑制 WNT 相关转录，影响 T 细胞维持和迁移。
该研究提出了 NOTUM 相关免疫干预的方向，尚未测试可用于患者的 NOTUM 抑制治疗。WICC 对树突状细胞、巨噬细胞及其他间质成分的作用，以及该细胞状态中的其他可干预分子，仍是作者列出的后续问题。