治疗后组织用于建立回顾性药筛队列
德国癌症研究中心（German Cancer Research Center，DKFZ）、海德堡大学医院（Heidelberg University Hospital）与 Xilis 等团队研究了微型类器官球（MicroOrganoSpheres，MOS）的化疗检测表现。MOS 将少量肿瘤细胞包埋于独立基质液滴中，以便自动分配和逐结构成像。
研究最初收集 33 位结直肠癌患者的 66 份手术组织。患者在手术前接受过新辅助化疗，团队将手术取出的组织解离、冻存，复苏后先扩增为患者来源肿瘤类器官，再转为 MOS。药筛与临床结果的对照属于回顾性分析。
39 个已扩增模型进入 MOS 制备及药筛，全部完成制备；药筛后有 2 个未通过质量控制。最终分析包含 21 位患者的 37 个病灶模型，其中 25 个来自肝转移、2 个来自淋巴结转移、10 个来自结直肠原发肿瘤。10 位患者贡献了多个病灶。
成像药筛在 MOS 制备后约 7 天完成
团队使用 MOSgen V4.2 微流体设备，将每个液滴约 20 个细胞的模型分配至 384 孔板，每孔约 40 个 MOS。模型恢复后加入药物，分别检测氟尿嘧啶、奥沙利铂及伊立替康活性代谢产物 SN-38，并比较相应组合。
高通量显微镜在加药当天及第 3、4 天采集明场和 EpCAM 荧光图像。算法先从明场图像定位每个液滴，再量化液滴内 EpCAM 信号，并用起始信号校正模型大小差别，计算相对于溶剂和杀伤参照的存活信号。
论文报告，从 MOS 制备到试验终点约需 7 天。此前从冻存组织建立和扩增类器官的时间另计。这个时程对应本研究的检测阶段，直接从新鲜肿瘤组织制备 MOS 属于作者提出的后续研究。
重复性试验使用同一个已建立的结直肠癌模型，由 6 位操作人员在 22 周内重复检测 35 次。5 种单药或组合的 pIC50 变异系数为 1.7%–2.5%，反映该模型和检测流程的重复性。
37 个病灶的药敏与临床反应有一定一致性
团队为每种方案拟合浓度—反应曲线，再按各模型的敏感程度排序，形成 0%–100% 的 MOS 药物反应评分。评分描述模型在当前队列中的相对位置。研究人员完成药筛后才获得临床反应资料，以保持实验检测时的盲法。
临床对照因病灶类型而异：转移病灶按影像变化分类，增长至少 20% 归为进展；结直肠原发肿瘤按术后病理退缩分级，将无退缩与存在不同程度退缩分开。两组使用不同的临床评价方式。
在全部 37 个病灶中，药敏区分临床反应与进展的 ROC 曲线下面积为 0.86，95% 置信区间为 0.74–0.98。按兼顾敏感度和特异度的阈值分类，准确率为 83%，95% 置信区间为 69%–100%；结果段报告敏感度 82%、特异度 85%。
27 个转移病灶、16 位患者的分析准确率为 76%；10 个原发肿瘤病灶、9 位患者的分析达到 100%。这些数字来自同一回顾性队列中的不同子集，原发肿瘤子集较小，作者提出仍需更大前瞻性队列验证。
同患者多个病灶影响统计结果与取材选择
按病灶分别比较时，全部、转移和原发肿瘤组中，临床进展样本的体外耐药评分均较高。考虑同患者多个病灶的相关性后，全部组及原发肿瘤组的关联仍达到统计显著；转移组的患者层面置换检验未达到显著，P 值为 0.212。
10 位有多个病灶的患者中，7 位的不同取材模型均能与临床分类对应；1 位的 2 个模型均被错分为无反应，另外 2 位则随所选病灶出现不同结果。取材位置因此成为后续临床研究需要考虑的具体因素。
患者层面的无病生存分析采用另一个评分阈值。模型敏感组的中位无病生存较长，但各组在常规检验及患者层面置换检验中均未达到统计显著。本队列中的药物反应分类与无病生存关联得到不同结果。
逐结构分析用于观察药物反应异质性
团队进一步观察同一培养孔内的单个 MOS。部分结构在高剂量组合下仍保留较多 EpCAM 信号，相邻结构则接近杀伤参照。这个分析把总体平均信号拆成独立三维结构的反应分布，为耐药相关研究提供候选对象。
研究还用图像特征模型 DINOv2 和降维可视化比较明场形态，看到不同药物条件的图像分布差别；分析同时识别了少量空图和成像位置等技术影响。本文展示的是图像特征与药物条件的探索性比较。
当前流程采用先扩增的肿瘤类器官。作者计划从新鲜解离组织直接制备 MOS，以缩短前期培养并保留更多非肿瘤细胞，用于研究免疫及其他微环境相关治疗。该方向尚未在本队列完成临床验证。