3 次血样与肿瘤活检比较突变状态
2016 年，美国密歇根大学（University of Michigan）等团队在 Journal of Thoracic Oncology 报告 1 例间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）阳性肺腺癌患者的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTC）研究。团队在初诊、克唑替尼耐药及随后脑转移时采集血样，扩增细胞后检测融合基因和耐药突变。
患者接受克唑替尼后最初出现影像改善，约 7 个月时发生肺门病变进展。该部位活检检出 ALK L1196M 突变，之后改用塞瑞替尼；后续脑转移活检仍有 EML4-ALK 融合，却未检出 L1196M。
扩增 CTC 在 3 次取样中均检出 ALK 重排，与相应活检一致。L1196M 在克唑替尼耐药时的 CTC 中出现，在脑转移时的 CTC 中未检出。研究因此把融合状态与耐药点突变分别跟踪。
扩增细胞的基因检测与药敏使用不同测量方法
每次取 5 mL 外周血，用 EpCAM 和 CD44 抗体组合捕获细胞，与癌相关成纤维细胞共同培养。细胞先在捕获装置中培养 2 周，再转到装置外扩增约 1 个月，随后用于检测。
荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）采用双色分离探针，判断 ALK 重排；3 次检测的阳性细胞比例分别约为 30%、15% 和 16%。桑格测序则检测 L1196M，记录该突变随治疗阶段的变化。
初诊培养物比较 2 种 ALK 抑制剂
药敏实验使用初诊时取得并扩增的 CTC。团队把培养物、单独成纤维细胞、耐药参照 A549 及敏感参照 H3122 分别放入 96 孔板，每孔 1,000 个细胞。每药测试 6 个浓度，每浓度 3 个技术重复，处理 72 小时后用 WST-1 测量活力。
扩增培养物对克唑替尼的半数抑制浓度（half-maximal inhibitory concentration，IC50）为 2,268 nM，对塞瑞替尼为 1,664 nM。塞瑞替尼在这组体外条件下所需抑制浓度较低。药敏所用初诊培养物与后续耐药取样是不同阶段的材料。
两种药物的 IC50 高于敏感 H3122 细胞系。作者推测，CTC 培养物中的成纤维细胞可能影响活力结果；纯成纤维细胞对照用于帮助解释这一混合细胞背景。
单病例验证了纵向检测和血源细胞药筛的可行性
本研究在同一患者中连接了重复血样、扩增细胞基因检测和体外药敏。实际药物测试为 2 种 ALK 抑制剂，突变变化则来自 3 次治疗阶段取样；两类实验回答不同问题。
作者将血源细胞扩增与药敏实验相连，并指出外周血比实体肿瘤活检更容易获得。本文实际结果来自 1 例患者，培养物中的成纤维细胞会影响对活力结果的解释。