视网膜类器官的 AAV 递送：聚凝胺与羟氯喹顺序处理增加报告基因阳性面积

顺序加入促进入胞试剂与羟氯喹

韩国团队比较聚凝胺（polybrene，PB）与羟氯喹（HCQ）对腺相关病毒（AAV）报告基因递送的影响。研究从二维细胞扩展到人源肝脏和视网膜类器官，重点检验先用 PB、病毒递送后再加 HCQ 的顺序处理。作者公开协议 v1 于 2025 年 6 月发布，9 月更新 v2，11 月发表正式研究。

协议使用 H9 人胚胎干细胞培养视网膜类器官，建议成熟时间为第 90–120 天；病毒处理后观察 15 天。HCQ 使用 15 µM，预处理比较为 1 小时，顺序处理则在病毒递送后延续 48 小时。实验以 mCherry 红色荧光报告蛋白的阳性面积评价递送，并用 TUNEL 检测 DNA 断裂，观察细胞状态。

视网膜阳性面积增加，其他给药条件未显著改善

视网膜类器官接受 PB 预处理、病毒递送与 HCQ 后处理后，第 15 天的 mCherry 阳性面积从病毒单独组的 17.9±3.5% 增加到 30.0±8.4%，约为 1.68 倍。PB 单独、HCQ 单独以及 HCQ 前后重复处理与病毒单独组相比，差异均未达到显著水平。

TUNEL 阳性面积比例约为 1.2%–2.2%，各处理组未见显著差异。mCherry 与 TUNEL 两项量化的 n 分别为 5–6 和 3–4。结果支持该顺序在所测模型中增加报告基因表达；细胞状态的比较限于本研究检测的 DNA 断裂等指标。

肝脏与视网膜需要各自设定处理时序

肝脏类器官的顺序处理使用 PB 8 µg/mL 预处理 1 小时、HCQ 20 µM 后处理 36 小时，第 10 天的 mCherry 阳性面积约为病毒单独组的 2.54 倍；HCQ 前后重复处理约为 2.11 倍。这一结果与视网膜中重复 HCQ 未显著改善的情况不同，说明相同辅助药物需要结合组织和处理时序评价。

视网膜 PB 条件在主文记为 8 µg/mL，Figure4 图注记为 10 µg/mL，两处存在差别；公开协议给出更宽的处理范围。作者将模型质量、成熟时间和病毒剂量列为影响因素，后续优化需要把这些条件与递送指标一起比较。

报告基因递送还需连接疾病功能终点

本研究量化的是病毒递送后的报告蛋白表达面积，未在这些实验中测量疾病相关功能恢复。作者提出，未来可比较更多载体与细胞类型，并研究 PB 和 HCQ 对入胞、胞内处理的具体作用。现有结果为类器官中的载体评价提供处理方案，作用机制仍需直接检测。