新鲜组织直接形成三维细胞球
药敏检测能否在治疗开始前给出结果，是患者来源模型走向临床比较的重要问题。美国 KIYATEC 与多家医疗机构在 Scientific Reports 报道了一项前瞻性研究，用新鲜肿瘤组织形成三维细胞球，在收到样本后 7 天内完成化疗药物测试，再跟踪患者实际治疗结局。
研究于 2014–2018 年纳入 154 名诊断为卵巢癌的女性。其中 92 名符合本次分析条件，为新诊断、尚未治疗并接受含铂化疗的患者：76 名接受初次减瘤手术，16 名通过腹腔镜活检取材。83 份组织完成了至少卡铂和紫杉醇测试，成功率为 90%。
9 次检测失败中，8 次与组织消化后或未加药对照中的细胞活力较差有关，另 1 次为操作失误。该体系使用短期成团，测试后可见不同大小、形态和紧密程度的细胞球，没有经过长期类器官扩增。
72 小时药物暴露与盲法检测
组织在手术后 24 小时内送达并消化成单细胞，接种到 384 孔细胞球微孔板，成团培养 24 小时后给药。单药浓度覆盖 0.005–100 µM，处理 72 小时，以 CellTiter-Glo 3D 测 ATP 活力。每个浓度取 7 个重复的平均值，并对未给药溶剂对照归一化。
测试另设空白、较高和较低杀伤作用的阳性对照，并要求对照发光信号和动态范围达到质量阈值。研究先在细胞系中比较 24–120 小时的处理时间，确定 72 小时窗口；6 名操作人员对同一原代样本、以及不同操作人员对细胞系的检测，都能获得相近的药物反应分类。
检测人员在实验期间只知道样本用于卵巢癌测试，不知道其他临床特征。药敏结果也未提供给患者或治疗医师，患者按常规接受治疗。这一设计让体外预测和后续临床判断保持独立。
辅助与新辅助治疗使用不同临床判定规则
术后辅助治疗组有 35 名患者具备足够随访资料。研究按含铂化疗完成后 6 个月内有无进展，结合影像和 CA-125 判断临床反应；影像与 CA-125 不一致时，优先采用影像信息。
这 35 名患者中，31 名的药敏分类与临床判断一致。26 名体外预测响应者均符合临床响应标准；9 名预测不响应者中，5 名临床不响应，另 4 名实际上有临床响应，属于假阴性。研究在这一组没有观察到假阳性。
新辅助化疗组的 9 名患者，则在腹腔镜取材前与间期减瘤手术前比较 CT，按实体瘤疗效评价标准（RECIST 1.1）划分完全缓解、部分缓解、疾病稳定和进展。8 名患者的体外分类与这一临床评价一致，另 1 名为假阴性。
将两组相加，39/44 的比较一致，整体为 89%。32 名体外预测响应者全部有临床响应；12 名预测不响应者中，5 名后来有临床响应。研究报告总体敏感度 86%、特异度 100%，其置信区间分别为 72%–94% 和 64.6%–100%。
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单药结果与实际组合方案相对应
体外测试使用单药，临床主要采用卡铂与紫杉醇联合方案。只要患者实际使用的至少 1 种药物在体外达到响应分类，就将其判为对临床方案的预测响应。若患者还接受多柔比星或吉西他滨，判定也纳入相应测试结果。
卡铂采用响应与不响应的二分类，其他部分药物分为响应、中等响应和不响应。研究根据临床资料、浓度—反应曲线和样本分布确定各药物阈值；不同药物的阈值和分类方式并不完全相同。
术后组的 4 名假阴性患者，取材前 CA-125 较低。作者随后探索性地剔除 CA-125 低于 60 U/mL 的患者，剩下的 29 名患者分类全部一致。这项后续分组用于寻找误判原因，仍需新增患者检验，未作为最初就预设的入选规则。
响应组无进展生存期较长，检测仍需更大队列验证
术后组中，体外预测响应者从手术起计算的中位无进展生存期超过 20 个月，不响应者为 9 个月。这为体外药敏与后续疾病进程之间的关系提供了另一种观察。
研究的主要限制是需要足够的新鲜活细胞，临床比较样本也只有 44 名。总体一致率中的假阴性说明，部分体外不敏感患者仍可能从常规化疗获益。作者提出在更大、独立队列中继续验证，再评估检测用于实际治疗选择的价值。