常用的 2 天测试能否覆盖慢起效药物
美国国家癌症研究所（National Cancer Institute，NCI）等团队在 Cancer Chemotherapy and Pharmacology 报道一项长期暴露比较。研究采用 NCI-60 人肿瘤细胞系库，考察不同作用机制的抗癌药是否需要不同观察时间。
传统 NCI-60 筛选在加药 2 天后检测细胞蛋白量。团队补充 3 天和 7 天二维培养，以及 11 天球状体培养，后 3 种条件用 ATP 发光信号评价细胞活性。球状体在加药前已培养 72 小时。
结果部分报告测试了 320 种化合物，其中 295 种在至少 55 个细胞系中具有全部时间条件的数据，构成主要分析集合。论文方法部分另写初始选择 300 种化合物；295 种是实际完整数据的子集。
延长时间既改变效力，也改变抑制曲线
甲氨蝶呤和雷替曲塞的反应主要表现为抑制曲线的下限逐渐降低：抑制幅度增大，IC50 的变化却未必同样突出。多柔比星、依托泊苷和拓扑替康则随着暴露延长出现更低的 IC50。
地西他滨在 2 天或 3 天时常未达到半数抑制，或需要高于 10 μM 的浓度；11 天时出现较稳定的活性。阿扎胞苷同样在较长暴露下表现更强。研究将这类变化与 DNA 甲基化相关药物的作用时间联系起来。
不同药物的时间响应存在差异。多数羟肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的浓度响应变化较小，作者讨论了它们在水溶液中的稳定性。罗米地辛在 ATP 检测的 3、7、11 天条件中则呈现效力增强。
两种 EZH2 抑制剂即使延长至 11 天，许多细胞系仍未达到半数抑制。受测细胞系中没有 EZH2 突变模型，这一模型背景也被作者用于解释结果。
浓度响应拟合保留未达到半数抑制的情况
团队用四参数曲线拟合各条件的处理组与对照组信号比，只接受受测浓度范围内插值得到的 IC50。没有达到半数抑制的曲线不向外推算出一个数值。随后按浓度范围、曲线跨度和拟合质量逐步筛选数据，比较各条件的相关性。
2 天与 3 天测试的 IC50 在较严格的数据筛选后呈较强相关，但延长至 7 天或 11 天时，部分慢起效药物的结果发生变化。研究因此同时观察浓度曲线形状、抑制程度和 IC50，结合各项指标判断反应。
培养形式和检测指标需要一并考虑
11 天条件采用超低吸附孔板与 10% 胎牛血清，2、3、7 天二维培养使用 5% 胎牛血清。2 天检测细胞蛋白量，后续条件测 ATP。时间、培养结构、血清比例与指标同时变化，是本次比较的实际设计。
这组资料为选择抗癌药观察时间提供了不同机制类别的参照。作者还指出，细胞体系缺少正常组织的代谢作用与体内分布差异；药物在培养液中的稳定性和细胞增殖状态也会影响长时间测试。