同一种 A549 球状体也会随培养时间变化
发表于 Biomedicine & Pharmacotherapy 的研究，用 A549 人肺腺癌细胞建立三维球状体，连续观察 20 天。研究者根据结构和增殖变化，将模型分为早期的第 4 天、中期的第 8–12 天，以及较晚的第 16–20 天，并比较顺铂与二甲双胍的反应。
球状体形成后逐渐增大，结构与组织分区更复杂，增殖活动则下降。这意味着同一细胞系即使采用相似的三维培养形式，不同成熟阶段也可能对应不同的药物反应背景。
顺铂的成熟期差异没有被所有读数同样显示
团队比较基于图像的形态分析、MTT 还原和细胞内 ATP 定量，并用 Ki67 表达评估增殖。随球状体成熟，顺铂敏感性逐步下降；形态和 MTT 得到的生长抑制 GI50 与 Ki67 呈负相关，而 ATP 读数低估了这种成熟期相关差异。二维 A549 培养中，没有观察到相应的增殖与顺铂敏感性关系。
测量终点还要结合药物作用特点
在二甲双胍的比较中，MTT 等代谢活性读数更能显示球状体的药物反应。两种药物的结果共同提示，不能只把球状体成熟阶段或某一种活性试剂当作固定标准；所选终点是否能反映待研究的药物作用，也会影响三维模型的解释。