从人肝细胞建立 28 位供者的可扩增模型
德国与韩国合作团队在 Nature 报告了一套人肝组织体外模型。团队从切除组织中取经组织学确认的正常非肿瘤肝组织，另使用冻存原代肝细胞，通过扩增、分化和多细胞组装，比较肝细胞功能及个体差异。
肝细胞经灌流分离后，采用上皮细胞黏附分子（EpCAM）磁性分选去除胆管细胞；EpCAM 阴性组用于建立肝细胞类器官，阳性组另建胆管类器官。激活 WNT 和 Yes 关联蛋白（YAP）相关信号，并去除烟酰胺后，类器官可按每周 1:2 比例传代超过 3 个月。
研究共建立 28 位供者的类器官，年龄 11–85 岁，包括 5 份冻存肝细胞样本。分化条件减少扩增相关刺激，保留 WNT 并加入地塞米松，使胆小管更细长、连接增加，部分肝细胞功能基因和药物代谢相关基因上调。
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单酶底物与维拉帕米测量的比较结果不同
在细胞色素 P450（CYP）的底物检测中，分化类器官的 CYP2C9 活性与培养 7 天的原代肝细胞接近，CYP3A4 活性略低；培养 1 天的原代细胞在这 2 种底物检测中更高。研究分别以 7 位类器官供者、4 位 7 天原代供者和 9 位 1 天原代供者比较相应活性，并按细胞数归一化。
维拉帕米试验则呈现不同结果。4 μM 药物处理 6 小时后，团队用直接进样串联质谱分别检测上清和细胞中的去甲维拉帕米，合并后按每 10,000 个细胞、每小时计算产物生成率。3 位供者的分化类器官产物生成显著高于培养 1 天的原代细胞，供者之间也有差异。
作者提出，多种参与维拉帕米代谢的 CYP 协同或持续表达，可能解释该结果。
门管区多细胞组装增强尿素和糖异生
团队把肝细胞类器官与胆管细胞、门管区成纤维细胞共同组装，条件允许时使用同一供者。96 孔优化采用 1 个肝类器官、25 个成纤维细胞和 100 个胆管细胞；后续使用 AggreWell 放大制备。组装体中出现胆管腔、邻近间质及周围肝细胞的组织关系。
与单独分化的肝类器官相比，组装体的尿素生成和糖异生增加，而与中央静脉周围肝细胞相关的药物代谢能力较弱；白蛋白分泌随培养增加。尿素试验有 3 位供者，糖异生有 4 位供者。
增加门管区间质细胞比例后，模型还出现胆管扩增、肝细胞减少与纤维化相关转录变化。当前组装体缺少免疫细胞、其他间质组分及门静脉和肝动脉，因此尚未形成完整的门管区结构。