比较吉西他滨与多柔比星的给药顺序
联合用药的效果可能随给药顺序改变。美国研究团队在 Bioengineering & Translational Medicine 报道吉西他滨与多柔比星的时序比较：先在乳腺癌细胞中寻找协同安排，再观察这种安排在动物肿瘤中的表现。
主要模型为人三阴性乳腺癌 MDA-MB-231 细胞，另用非致瘤乳腺上皮细胞系 MCF-10a 作比较。研究先筛查多柔比星、紫杉醇、伊沙匹隆和吉西他滨的组合，再深入分析吉西他滨与多柔比星。细胞反应采用 MTT 代谢活力检测。
先用吉西他滨，在癌细胞中协同更强
3 种安排的总观察时间均为 72 小时：两药同时处理 72 小时；吉西他滨处理 24 小时，再用多柔比星 48 小时；或按相反顺序处理。先用吉西他滨及同时给药均比先用多柔比星更明显地抑制细胞生长。
研究以组合指数（combination index，CI）评价协同，计算时使用与各联合安排具有相同暴露时序的单药剂量反应曲线。先用吉西他滨得到更低的 CI；在受测药物摩尔比范围内，MDA-MB-231 的 CI 均低于 0.2。
同一顺序对 MCF-10a 的影响则随药物比例改变：吉西他滨与多柔比星摩尔比低于 1 时呈协同，高于 1 时呈拮抗。癌细胞与参照细胞反应不同，药物比例也需要单独考察。相应曲线汇集至少 12 个受测孔。
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细胞周期和凋亡相关信号提供进一步线索
在较高测试浓度下，吉西他滨使细胞积累在 G0/G1 期及早期 S 期，多柔比星主要引起 G2/M 期积累。吉西他滨撤药后，部分细胞周期变化仍持续。研究据此讨论，第一种药物改变细胞状态，可能影响随后药物的反应。
先用吉西他滨后用多柔比星时，caspase-3 活性约为同时给药的 2 倍、反向给药的 10 倍。该测量按样品总蛋白归一化，来自 3 个重复，反映凋亡相关酶活性。与 MTT 和细胞周期结果合并观察，先用吉西他滨具有更强的体外效应。
动物实验没有清楚重现顺序优势
动物肿瘤实验中，两种先后顺序的联合用药均优于单药，但先用吉西他滨的优势没有像细胞实验那样清楚出现。无论单周期还是重复周期的比较，作者都未观察到足以重现体外顺序差异的结果。
作者讨论了体内浓度变化、肿瘤微环境和给药间隔等因素。细胞培养中的药物暴露与动物肿瘤经历的暴露不同，因此时序研究还需连接药代资料，检验选定浓度与处理时间在体内是否能够达到。