
两种偶联物保留 EGFR 识别,结合亲和力发生变化
比萨、热那亚及锡耶纳等团队将氨基双膦酸衍生物与表皮生长因子受体(EGFR)抗体西妥昔单抗偶联,得到抗体药物偶联物(ADC)CetDC310 和 CetDC315。两者的平均药物抗体比(DAR)约为 6.8 和 23,与原抗体作比较。
两种偶联物仍可识别所测结直肠癌细胞的 EGFR,CetDC315 的最大结合信号在部分细胞系中较高,其表观结合亲和力却明显下降。3 个细胞系中,原抗体的表观解离常数约为 0.01–0.02 µg/mL,CetDC315 约为 24–189 µg/mL。
CetDC315 对不同细胞系的生长抑制不同
在 Caco-2 中,2 µg/mL CetDC315 处理 120 小时使生长信号下降约 75%,原西妥昔单抗约为 25%。相应三维球状体的平均直径约为 60 µm,原抗体组约为 128 µm,未处理组约为 145 µm。
带有 KRAS G13D 变异的 HCT116 在所测条件下未出现同样的生长抑制;CetDC310 也未显示 CetDC315 的增强效果。不同偶联物及肿瘤背景产生了不同反应。
健康供者和肿瘤材料中的 Vδ2 T 细胞可扩增
Vδ2 T 细胞属于 γδ T 细胞的一类。团队在添加白细胞介素 2 的共培养体系中比较了 6 名健康供者的 T 细胞、2 个患者来源类器官及结直肠癌组织细胞。健康供者与 LS180 共培养 14 天后,CetDC315 条件的 Vδ2 T 细胞比例约达 60%,起始比例为 0.5%–4%。
2 个类器官模型与 2 名健康供者的 T 细胞共培养,在图 5 的第 25 天也观察到 Vδ2 T 细胞增多。肿瘤材料中,起始仅占 0.01%–0.5% 的 Vδ2 T 细胞在 CetDC315 条件下升至约 30%–35%;图 5 展示的是 4 例患者材料。
这些扩增实验的终点描述有差别:类器官共培养方法写为 21 天,结果图采用 25 天;肿瘤消化材料方法列有 5 个样本编号,图中展示 4 例。论文没有解释这些差别。
类器官来源靶细胞在共培养中的残留量下降
杀伤相关检测使用 3 名健康供者的预扩增 Vδ2 T 细胞,以及 OMCR19-003TK 类器官来源细胞。靶细胞先被解离并在板上贴壁,效靶比为 2:1,共培养 48 小时;结晶紫染色用于评价残留贴壁肿瘤细胞量。
CetDC315 共培养条件的吸光度约为 0.7,原西妥昔单抗约为 1.0,提示前者的残留靶细胞量较低。这一终点来自解离后的贴壁细胞。方法写 ADC 从检测开始加入,图 6 则描述先处理靶细胞 24 小时再加 T 细胞;论文没有解释两种时序的差别。
作者提出可释放的载荷及其相关代谢物可能参与 Vδ2 T 细胞反应,但未直接测定该代谢链条。CetDC315 的较高 DAR 对聚集、体内分布和安全性的影响也尚未检验。现有结果限于体外细胞系、类器官来源细胞和有限患者组织材料。