17 项体外检测仍需核对生物学覆盖
2025 年 4 月，ALTEX 发表第五届发育神经毒性测试国际会议（5th International Conference on Developmental Neurotoxicity Testing，DNT5）报告。会议于 2024 年 4 月 7–10 日在德国康斯坦茨举行，由康斯坦茨大学（University of Konstanz）的 CAAT-Europe 等组织，讨论怎样把体外检测资料用于风险评估。
会议的核心是发育神经毒性体外检测组合（DNT in vitro test battery，DNT-IVB）。这组检测通过不同细胞过程观察化合物可能带来的影响。报告讨论的核心组合含 17 项检测，同时强调，组合能覆盖哪些发育过程，需要逐项说明。
例如，小胶质细胞参与的神经炎症及激素介导的发育效应，当时仍是需要补充的内容。某项检测没有发现变化，必须结合这些覆盖缺口解释，才能判断它对所问安全性问题提供了多少信息。
方法可用性需要四类证据共同说明
报告用一张方法可用性示意图区分四类内容：完整的方法描述、透明的数据管理、技术特征，以及生物学相关性。它们分别回答测了什么、资料怎样处理、结果是否稳定，以及测量是否对应人体内有关过程。
技术特征包括重复性、性能和适用的化合物范围。生物学相关性则涉及检测包含哪些调控过程、化合物表型能否得到机制解释，以及模型中的组成和响应与体内情况有何联系。
这些要求要随具体用途调整。用于先筛出值得继续研究的化合物，与用于影响实际风险判断，所需证据的分量不同；报告据此讨论怎样围绕使用情境，确定方法描述、技术性能和生物学证据应达到的要求。
筛查命中需要结合细胞毒性解释
报告介绍的 DNT Health Effects Innovation 项目，用调整后的检测组合为化合物进一步评价安排优先次序。该项目未纳入核心组合中的两项神经突生长检测，另加入斑马鱼行为检测。按报告所记载的进度，第一阶段完成 115 种化合物筛查，第二阶段当时正研究 108 种化合物，其中增加了混合物和更多发育神经毒性阴性化合物。
第一阶段中，神经网络形成检测对受测化合物较敏感，但不少命中并不具有发育神经毒性选择性。报告因此强调结合细胞毒性资料解释结果，区分发育过程受扰动的信号与细胞普遍受损带来的变化。
这种筛查提供的是后续评价线索。哪些命中需要补充检测、需要怎样的活性或暴露信息，仍取决于研究问题。报告也指出，阳性响应可能需要继续确认，检测终点与不良结局之间的定量关系尚不充分。
米非司酮案例：从体外活性估计体内剂量
药物案例中，Helena Hogberg 介绍了米非司酮的整合评估。报告称，米非司酮起初被视为发育神经毒性阴性化合物；系统文献回顾却发现，相关体外资料涉及神经祖细胞增殖、分化和树突棘密度变化，体内资料则涉及多巴胺神经元、行为及记忆变化。
团队据体外活性浓度进行体外到体内外推（in vitro to in vivo extrapolation，IVIVE），估算可能产生影响的体内剂量。报告称，所得估计与人体治疗剂量及体内研究出现发育神经毒性效应的剂量范围有重叠，因此提出需要进一步评价的可能风险。
这里的关键是把细胞中的活性与暴露资料放在一起解释。报告所示的整合框架分别考虑危害检测、毒代动力学、暴露评估和资料整合。吸收、分布、代谢和排泄资料用于建立基于生理的动力学模型，为外推提供支持。
报告还把改进外推和动力学模型列为后续工作，以减少检测组合用于风险判断时的不确定性。
实验室转移与参考化合物仍在完善
重复性需要落实到不同地点和操作者。报告补记，欧洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）支持的 17 项检测实验室间转移工作于 2024 年 5 月开始；检测数据处理方式的协调也仍在讨论。这是会后补记的工作启动日期，报告未给出全部转移验证的完成结果。
与会者提出，通过明确阳性和阴性对照、重复与可接受变异的要求，提高结果的稳健性。但参考化合物怎样选、哪些应判为阳性或阴性，仍存在分歧，这也影响对整套组合敏感性和特异性的判断。
报告因此把增加合适的参考化合物、补足生物学检测内容，以及建立分层或明确的判断方式列为推进方向。它们既关系到同一检测能否转移，也关系到一个阴性或阳性结果在整合评价中应占多大权重。
报告保留不同用途与不同发言的边界
在监管使用部分，报告强调说明 NAMs 资料相对于其他证据的作用，以及判断出错可能带来的后果。资料对决策影响越大、潜在后果越重要，越需要充分说明其科学可信程度。技术标准和良好体外方法实践可作为推进的中间环节。
报告明确声明，它记录多方会议及独立发言，不是共识声明，也不代表所有作者或其供职机构的共同立场。文末说明本项目没有生成新的实验数据；部分作者同时具有检测服务或平台商业化角色。理解这些来源属性，有助于区分已报告的案例、仍在推进的工作和发言者提出的建议。