在活体样本中同时观察结构和代谢
美国南加州大学（University of Southern California）和洛杉矶儿童医院（Children's Hospital Los Angeles）团队，在 Investigative Ophthalmology & Visual Science 报道了视网膜类器官的多模态成像比较。研究希望在保留组织的情况下观察其发育状态，再与固定后的组织学结果对应。
研究主要使用人胚胎干细胞（human embryonic stem cells，hESC）来源模型，观察培养第 46、89 和 151 天的样本。诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）来源类器官另用于重复部分成像观察，相关结果列于补充图。
OCT 能辨认晚期条带，microCT 未显示细胞分层
光学相干断层成像（optical coherence tomography，OCT）利用组织反射信号显示内部结构。第 151 天的 4 个类器官均出现表层低反射条带，第 89 天的 4 个则均未出现，两组差异的 P 值为 0.029。
第 46 天样本中也有 1/4 出现低反射信号，但其边界特征与晚期条带不同，作者认为可能是伪信号。晚期条带宽约 25 μm，与组织学中出现的致密层在时间上对应；其含义仍需结合位置和切片判断。
OCT 的条带对扫描方向敏感，向深处成像时还会产生阴影。用于固定样本的显微 CT（microcomputed tomography，microCT）能显示更深的三维结构和空腔边界，却没有在第 151 天样本中辨出细胞层次。
高光谱成像显示外层分子信号逐渐增强
高光谱成像（hyperspectral imaging，HSpec）记录各位置的自发荧光光谱，再通过相量分析与已知分子特征对应。研究据此推定视黄醇、视黄酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide，NADH）的空间分布。
随着培养日龄增加，视黄醇和视黄酸相关信号在表层增强、在深层减弱。团队按每个日龄 4 个类器官比较表面与深层兴趣区域；外层信号增强的趋势，与光感受器标志 CRX 出现的位置相对应。
这些结果来自光谱特征与组织位置的对应，反映的是相对信号分布。它们帮助判断光感受器相关区域是否形成，并为同一样本的结构观察补充了分子信息。
FLIM 记录到表层与核心不同的代谢相关特征
荧光寿命成像显微术（fluorescence lifetime imaging microscopy，FLIM）分析内源荧光衰减时间。研究重点观察 NADH 的游离与结合状态，并以两者的比值描述代谢相关变化。
第 46 天类器官中的游离/结合 NADH 比值较低，空间分布较均一。至第 151 天，表面比值升高，核心仍相对较低；外侧高比值区域与光感受器标志和视黄醇信号所处区域接近。作者将这一变化解释为外层细胞的糖酵解相关特征增强。
FLIM 比较在每个日龄使用 4 个类器官，并从 4 个深度采集影像。分析按解剖兴趣区域汇总像素，再比较不同位置和日龄的平均比值；同一类器官内的深度和区域测量描述其空间差别。
代谢影像与细胞标志对应，年龄比较采用不同批次
活体成像之后，团队用组织染色检查细胞身份。第 151 天样本的 CRX 阳性细胞形成较致密的外层，但早期可见的神经节细胞标志 BRN3 已未检出；外侧结构形成与内层细胞保持并非同一过程。
研究在同一组类器官上实施不同成像，以对应各类观察；不同培养日龄的样本则来自不同分化批次。论文比较的是各阶段样本，没有连续数月追踪同一个类器官。
不同 hESC 和 iPSC 制备重复观察到相似的分层和代谢趋势，作者据此认为，批次效应没有明显改变这些主要发现。结果仍反映不同日龄样本之间的差别，单个类器官的连续变化还需要长期观察。
多模态观察为模型选择提供互补信息
OCT 侧重层次结构，HSpec 提供内源分子光谱分布，FLIM 补充代谢相关信号，固定后的染色则检查细胞身份。它们共同帮助研究者判断样本处于何种状态，以及外层、内层和代谢变化是否一致。
本研究未进行候选药物处理或药物反应预测。其具体贡献，是把非破坏性结构观察与代谢相关成像、组织学参照对应起来，为后续疾病及药物研究的样本选择和质量记录提供测量依据。