23 名患者提供 31 份治疗前后材料
广东省人民医院及合作团队纳入 23 名骨肉瘤患者,年龄中位数为 18 岁。研究分析 18 份新辅助化疗前活检材料和 13 份治疗后切除材料,其中 8 名患者具有前后配对样本,共 31 份。患者均接受包含甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂和异环磷酰胺的 MAPI 新辅助化疗。
研究将肿瘤细胞置于 Matrigel 三维培养,观察形态、SOX9 与 vimentin 等标志,并用形成能力(OFP)区分生长状态。OFP-I 表示较旺盛形成,OFP-II 为中间状态,OFP-III 则在约 3 周后仅有很少结构或难以形成,伴低 EdU 增殖信号。各样本形成速度不同。
在 13 份治疗后材料中,7 份为 OFP-I,2 份为 OFP-II,4 份为 OFP-III。8 组治疗前后配对样本中,5 组等级稳定,3 组发生变化。OFP 反映这一培养条件下残余细胞的形成和增殖表现。
药敏评分由 4 种单药反应相加
团队分别暴露 5 种药物:多柔比星、顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺及卡铂,持续 96 小时。检测用活/死染色,根据处理组相对未处理对照增加的死亡比例形成标准化抑制率(SCIR),再划分为 4 个等级。检测分别测量各单药的反应,临床 MAPI 则包含联合或序贯用药。
细胞抑制加权评分(CIWS)将 MAPI 中 4 种药物的等级分别转为 0–3 分后相加,卡铂不参与这一总分。以本队列生存数据进行阈值选择和自助重采样后,研究采用 CIWS≥5 作为体外敏感分界,并将 OFP-I 与 OFP-II/III 分为高低形成能力组。
这些分界在同一研究队列内确定和评价。作者在讨论中明确,阈值仍需要独立队列的校准与前瞻评价;当前体外体系也没有完整模拟体内药物代谢、免疫及骨组织微环境。
治疗前药敏与化疗后影像:18 例中 15 例一致
18 份治疗前模型的 CIWS 分组与新辅助化疗后实体瘤疗效评价标准(RECIST)1.1 影像分组,在 15 例中一致,为 83.3%,95% 置信区间 58.6%–96.4%。研究将完全缓解、部分缓解和稳定病情归为同一响应组,将进展归为另一组;这一比例衡量的是该二分类定义下的符合情况。
8 名患者前后 CIWS 变化方向与影像变化方向,在 6 例中一致。连续变量相关分析呈同方向趋势,但 Spearman 与 Kendall 检验的 P 值分别为 0.063 和 0.056,未达到研究设定的 0.05 显著性水平。
患者 OS01 提供了一个具体例子:治疗前 CIWS 为 5,治疗后降至 3;术后病理记录超过 90% 坏死,但随后仍发生肺转移。这个病例说明,取材时点和存活残余细胞的体外表现,可以与初始影像或病理反应给出不同信息。

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长期结局分析受样本规模和指标定义限制
13 份治疗后模型与 5 年随访分组的比较,作者报告 11/13 一致,为 84.6%。原文方法部分将参照写为 5 年无病生存,结果和图 6 则写为 5 年 RECIST;这两种长期结局指标的名称和定义在论文中没有统一。
同一 13 人分析中,药敏分组符合 11/13,较早影像分组符合 9/13;直接比较两种分类正确性的 McNemar 检验 P=0.625。两种分类的正确比例没有显著差异。按 CIWS 或 OFP 分组的生存曲线呈现差异,但阈值和关联都来自当前队列,尚未完成独立外部评价。
后续研究需要采用明确的长期结局定义,在独立患者队列中评价阈值稳定性,以及模型检测能否改善实际治疗决策。