两对同基因背景模型用于辨别 OPTN 变异影响
青光眼中的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGC）会逐渐退化。美国印第安纳大学（Indiana University）等团队在 Stem Cell Reports 以人多能干细胞建立视网膜类器官，观察 OPTN(E50K)变异引起的细胞变化，并测试自噬相关药物干预。
模型包括患者来源诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）及相应的变异校正细胞，也包括 H7 人胚胎干细胞与带 E50K 变异的 H7 细胞。两对同基因背景对照帮助研究者比较变异效应，降低不同细胞系背景对结果的影响。
团队保留部分三维类器官观察组织内变化，也从类器官中分离神经节细胞，培养后检查神经突与电生理。三维组织和分离细胞分别用于组织层次与单细胞功能评价。
早期分化相近，较长期培养后出现退化表型
变异组和对照组早期都能形成视杯样类器官。第 30 天的 PAX6、CHX10 表达以及第 60 天的神经节细胞、光感受器分布未显示明显差异；分离后培养 1—3 周的神经节细胞在形态上也相近。
到分离后第 4 周，变异神经节细胞的神经突更短、分支更少，细胞体面积也较小。这项形态比较来自 4 次独立分化，各次使用上述 4 条细胞系，显示异常在较长期培养后才逐渐显现。
BRN3B、ISL1 等神经节细胞转录因子的表达比例下降，但 MAP2 阳性细胞的总体比例未显著变化。团队把这些指标并列分析，以区分细胞仍在而特定标志下降的情况。视网膜前体与光感受器标志没有同样的减少。
这也影响后续检测的细胞选择。作者指出，病变较晚阶段的细胞可能降低 BRN3 相关报告信号；只按这一信号筛选，可能更容易记录到退化程度较轻的细胞。
分离神经节细胞的兴奋性发生改变
膜片钳测量显示，变异组与对照组都可产生离子电流和动作电位，静息膜电位没有显著差异。不过，变异组细胞电容更低、输入电阻更高，触发动作电位所需的电流阈值也更低。
在电流刺激下，变异神经节细胞产生更多动作电位。这部分记录来自 2 次分化的 H7 和 H7(E50K)模型，分别包含 28 和 46 个技术记录，与四细胞系的组织染色重复分开。作者将较高兴奋性视为可能参与早期退化的因素。
转录分析进一步发现与蛋白清除、自噬及神经突生长有关的表达变化。研究随后转向三维类器官，检查这些线索是否对应组织内的 LC3 积聚与细胞凋亡相关变化。
雷帕霉素降低类器官内层的 LC3 积聚与 caspase-3
在分化约 2.5 个月的类器官中，OPTN(E50K)组的 LC3 明显积聚于神经节细胞所在内层。图像定量分别检查 LC3 斑点的数量、大小和总面积；变异组这三项指标均高于同基因背景对照。
团队用 2 μM 雷帕霉素处理 24 小时，随后进行免疫染色。药物处理后，内层 LC3 积聚显著减少，活化 caspase-3 也降低。该比较来自 3 次独立分化，每次包括 4 条细胞系，测量对象是组织中自噬和凋亡相关标志。
未处理的变异类器官中，BRN3 阳性神经节细胞更少，而 OTX2 标记的光感受器数量没有显著差异。内层与外层的比较表明，这些异常更集中于神经节细胞所在区域。
作者据雷帕霉素结果提出，自噬异常与该变异引起的凋亡变化存在联系。这项人源模型工作给出了可检测的组织表型和药物反应，使后续候选干预可以围绕 LC3 积聚、凋亡标志及神经元功能分别设计评价。