先区分两类脱靶作用
FDA 在 2024 年 11 月发布寡核苷酸治疗药物非临床安全评价指南草案，讨论这类产品的药理和安全研究。寡核苷酸可通过与核酸序列结合，或与其他分子相互作用产生药理效应，因此，其脱靶风险不能完全沿用小分子的分析方式。
草案区分杂交相关和非杂交相关的脱靶作用。前者来自药物与非预期核酸序列结合，可能改变基因表达；后者涉及与蛋白或其他成分的相互作用等机制，也可能受到寡核苷酸序列的影响。计算预测和体外试验对两类问题的适用程度不同，需要分别论证。
序列相关风险可由计算预测提出候选，再用体外结果核查
对于杂交相关风险，草案讨论了结合计算分析与体外研究的路径。计算分析需考虑与药物作用有关的转录本和遗传信息范围，并说明为何采用相应的匹配条件。不同类型的寡核苷酸，其作用机制和对序列不匹配的容忍程度并不相同，不能只采用统一的筛选规则。
草案还建议考虑有关核酸范围及可能具有作用的组成，包括在适用情况下的正义链、反义链和相关代谢物。评价不能只检查一个预期结合对象，而要说明所用分析覆盖了哪些潜在作用，以及哪些部分没有被覆盖。
计算结果提供的是可能发生作用的对象。后续体外研究需要判断这些预测是否造成实际的功能或表达变化；转录组分析等资料可以参与这一核查，但所用细胞、分析方式和判定依据应与产品相符。相似序列的预测与后续功能及风险评价分别提供不同信息。
组织表达和药物暴露也会改变风险的重要性。某个潜在脱靶对象是否在实际接触药物的组织中表达、作用是否持续，以及药物能否达到该处，都需要与预测一并考虑。草案因此把序列、组织和暴露放在同一风险判断中。
种属差异使人源体外数据更有针对性
寡核苷酸的作用可能具有明显种属特异性。动物缺少相应的结合序列时，即使接受药物，也未必呈现预期的药理反应。草案讨论了替代寡核苷酸和人源体外资料的作用，并建议说明这些研究与拟用人体产品之间的联系。
如果动物中某个序列相关作用与人体不同，动物毒性结果的解释也会受到影响。人源细胞能够用于观察人体相关药理或表达变化，但它是否覆盖特定组织的功能与暴露，还需根据实验体系判断。不同证据的互补性比单独采用一种模型更重要。
小分子安全药理面板不必直接套用到所有产品
草案指出，以杂交为主要机制的寡核苷酸通常不需要照搬针对小分子的 G 蛋白偶联受体、离子通道和酶类次级药理面板。对适配体，或已有毒性现象却缺乏解释的产品，相关研究仍可能有价值。是否开展面板测定，应由药物机制与具体风险决定。
对特征已有较充分认识、且已证明抑制 hERG 通道的能力可忽略不计的寡核苷酸类别，草案认为通常无需开展体外 hERG 测定。但若产品可能改变相关表达或功能，或在心脏达到重要暴露水平，则应重新考虑测定的必要性。草案仍建议在临床研究前开展体内心血管安全评价。
非杂交风险不能只靠序列分析解释
与蛋白等成分的相互作用，未必能够从序列匹配结果中充分预测。这类非杂交风险还需要经验性毒性资料和适当的功能研究。杂交相关与非杂交相关风险，需要采用各自适用的方法提供证据。
这份草案的特点，是按作用机制分配证据：计算分析寻找潜在序列相关作用，体外研究核查人体相关功能，动物与其他资料补充仍未解决的系统性风险。文件仍是征求意见性质的指南草案，所述安排需结合具体产品和完整安全评价方案理解。