血管化视网膜类器官的免疫组分与结构质控
融合人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）来源的血管和视网膜类器官，分别以药理对照、炎症基因及屏障结构检查新增细胞组分。
用途与模型
- 研究用途
- 为视网膜血管与免疫相关治疗研究评价模型组成；本研究抑制剂用于血管类器官身份检验，未验证融合模型中的治疗药效。
- 模型与细胞来源
- 3 条独立人 iPSC 系；血管类器官（vascular organoid，VO）与视网膜类器官（retinal organoid，RO）在微孔融合后形成血管化视网膜类器官（vascularized retinal organoid，vRO），并长期培养。
- 方法版本
- 2025 年原研究版本
- 实验形式
- 静态融合类器官；免疫荧光、逆转录定量聚合酶链式反应（reverse-transcription quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）与整体 RNA 测序联合判断。
材料与平台
- 人源模型
- 血管类器官包含内皮样管、周细胞和小胶质细胞；与视网膜类器官融合。
- 药理及炎症对照
- VO 第 23 天加入 2 μM PLX5622 共 7 天，二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）为参照；VO 和融合模型分别进行脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）炎症比较。
- 质量测量
- IBA1 阳性细胞密度、TNF-α/IL-8 等表达、CD31/Claudin-5/PLVAP 和周细胞定位。
测量指标与分析
- 小胶质细胞密度及药理反应
- 炎症相关基因表达
- 血管结构与细胞周围定位
- 屏障相关蛋白结构标志
VO 的药理身份对照与 vRO 炎症反应分开分析；屏障结构和未检测的通透性分开判断。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- VO 比较 PLX5622 与 DMSO；vRO 与 RO 比较炎症刺激后基因表达；融合模型结构与 VO/RO 比较。
- 测试范围
- IBA1 密度图 5E 注明 n=6–9 类器官；血管直径 10 类器官、每个 2–4 条；Claudin-5 荧光 7 类器官。
- 参照体系
- DMSO、单独 RO 或 VO，以及 VEGF-A 有/无条件。
- 研究结果
- PLX5622 后 IBA1 阳性密度由 531.5±167.0 降至 22.15±7.984 个/mm²；融合模型有血管/免疫细胞并对炎症刺激作出响应。
适用条件与研究局限
- 药理去除实验实施于 VO，不能替代融合模型的疾病治疗比较。
- VEGF-A 有/无组 AIF1 差异不显著。
- 屏障证据是组成和蛋白定位，未检测通透性和血管灌流。
来源与原文
- Generation of vascularized retinal organoids containing microglia based on a PDMS microwell platform原始研究 · Science Advances · 2025-10-10