SFTPC-I73T 肺泡类器官的米托蒽醌抗纤维化作用评价
配对野生型与 I73T 纯合模型，测药物对纤维化标志和胶原凝胶收缩的影响。
用途与模型
- 研究用途
- 研究突变相关肺泡上皮异常及抗纤维化药物作用。
- 模型与细胞来源
- 购自细胞供应商的人 iPSC 及 CRISPR/Cas9 建立的 SFTPC-I73T/I73T 配对细胞；EpCAM 分选后形成肺泡类器官。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- 96 孔圆底聚集后转 6 孔低吸附培养；组织染色、定量 PCR（qPCR）和胶原凝胶面积。
材料与平台
- 细胞与模型
- 原 iPSC 为 Gibco A18943PIS，StemFlex 及 10 μM Y-27632 维持。分化第 21 天用 0.8 U/mL collagenase B 处理 1 小时、解离缓冲液 10 分钟；20 μL CD326/EpCAM 磁珠在 4 °C 孵育 30 分钟后分选。
- 聚集与继续培养
- EpCAM 阳性细胞每孔 25,000 个接种圆底 96 孔板，加 50 μL、1:15 稀释 Matrigel，37 °C 过夜；转 6 孔低吸附板，在 AEC 成熟培养液中再培养 9 天。
- 药物处理
- TGF-β 25 ng/mL 诱导；米托蒽醌 6 μM 共同处理 48 或 72 小时，比较野生型、突变、TGF-β 及共同处理条件；原基因敲低实验另用 USP11 shRNA。
- 胶原收缩及分子检测
- 模型细胞按 3×10^5 个/mL 混入 0.75 mg/mL 鼠尾胶原，37 °C 凝胶 15 分钟后脱离孔底培养 72 小时，以 ImageJ 测凝胶面积。免疫染色和 qPCR 比较纤维化/上皮标志，qPCR 按 GAPDH 归一化。
测量指标与分析
- COL1A1、α-SMA、fibronectin mRNA
- USP11 与纤维化标志免疫染色
- 胶原凝胶剩余面积
按突变身份、USP11 降低表达和药物处理分别比较。图 7 为 3 次独立实验；多组采用双因素 ANOVA 及 Tukey 检验。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 野生型和纯合突变模型分别接受 TGF-β 及米托蒽醌。
- 测试范围
- 野生型/基因编辑 iPSC 来源模型；图 7 记录 3 次独立实验。
- 参照体系
- 野生型、突变、TGF-β 单独及 TGF-β/米托蒽醌共同处理。
- 研究结果
- 共同处理降低纤维化标志、减少胶原凝胶收缩。
适用条件与研究局限
- 纯合基因编辑模型，与常见临床杂合变异不同。
- 米托蒽醌用于检验 USP11 药物抑制，未由该实验单独排除其他药理作用。
- 分化方法概要及成熟培养液引用既有协议；主文不同图注的模型取样日程有第 30 天和第 45 天。