视网膜类器官的 AAV 顺序辅助递送评价
以聚凝胺（PB）预处理和羟氯喹（HCQ）后处理，比较视网膜类器官的腺相关病毒（AAV）报告基因表达和细胞死亡指标。
用途与模型
- 研究用途
- 类器官中的病毒载体递送条件优化。
- 模型与细胞来源
- H9（WA09）人胚胎干细胞衍生视网膜类器官；公开协议建议第 90–120 天成熟模型。
- 方法版本
- 2025 年原研究版本
- 实验形式
- 低吸附 96 孔板，每孔 200 µL 病毒培养液；病毒剂量 1×10¹⁰ vg/类器官；37 °C、5% CO₂，观察 15 天，每 2 天换液。
材料与平台
- 顺序与比较
- PB 预处理 4 小时，随后 AAV，再以 HCQ 15 µM 后处理 48 小时；另设 PB 单独、HCQ 单独、HCQ 1 小时预处理加 48 小时后处理及病毒单独组。
- 条件差别
- 视网膜 PB 在结果正文为 8 µg/mL，Figure4 图注为 10 µg/mL；协议对类器官给出 5–15 µg/mL 范围。三处记载不同。
- 成像
- 第 15 天测 mCherry 阳性面积；固定、切片后以 TUNEL 染色检测 DNA 断裂，量化阳性面积比例。公开协议给出 10 µm 切片、10×–40× 成像。
测量指标与分析
- mCherry 阳性面积
- TUNEL 阳性面积比例
两类指标分别量化：mCherry 阳性面积 n=5–6，TUNEL 阳性面积比例 n=3–4。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 比较辅助药物顺序与单独处理，对照病毒单独递送。
- 测试范围
- 单一 H9 来源模型；视网膜 mCherry 量化 n=5–6，TUNEL 量化 n=3–4。
- 参照体系
- 病毒单独、PB、HCQ、PB 加后续 HCQ、HCQ 前后处理。
- 研究结果
- PB 加后续 HCQ 的 mCherry 阳性面积约为病毒单独组的 1.68 倍；其余视网膜条件未显著提高该面积，TUNEL 阳性面积比例的组间差异也未达到显著性。
适用条件与研究局限
- 视网膜 PB 浓度在主文为 8 µg/mL、图注为 10 µg/mL，公开协议为 5–15 µg/mL 范围，实际单一浓度存在记载差别。
- 本文评价 mCherry 报告基因递送，后续需要分别验证不同 AAV 血清型和治疗载荷。
- 尚需疾病功能、更多细胞类型和直接胞内机制验证。
来源与原文
- Synergistic enhancement of AAV gene delivery in 2D cells and 3D organoids using polybrene and hydroxychloroquine原始研究 · PLOS One · 2025-11-14
- Synergistic Enhancement of AAV Gene Delivery in 2D Cells and 3D Organoids Using Polybrene and Hydroxychloroquine (Version 2)方法资料 · protocols.io · 2025-09-30