PKP2 心肌细胞连接及组织钙波药物评价
在人 iPSC 心肌模型中，同时比较连接蛋白、骨架及刺激后的组织钙波，并检验 SB216763 的作用。
用途与模型
- 研究用途
- 研究 PKP2 疾病表型的药物改善及野生型模型中的结构不良变化。
- 模型与细胞来源
- PKP2R413X 杂合变异与同基因背景野生型人 iPSC 衍生心肌细胞。
- 方法版本
- 2023 年 PKP2R413X 细胞对与组织比较
- 实验形式
- 软 PDMS 上标准化细胞对，以及微结构明胶基底引导排列的工程组织；单层另用于蛋白分级。
材料与平台
- 模型
- C98 为主要变异克隆，C93 用于关键结果复核；对应同基因野生型。
- 处理
- SB216763 与 DMSO 溶剂对照。
- 检测
- 连接与骨架免疫染色、空间分布热图、蛋白分级、X-Rhod-1 钙荧光成像。
测量指标与分析
- N-cadherin/plakoglobin/PKP2/CX43 定位
- 肌动蛋白和肌节排列
- β-catenin 亚细胞分布
- 第 6 与 9 天组织钙波速度
按基因型、处理、时间和模型形式分别比较；钙波速度由刺激后的荧光传播计算，蛋白分级不与细胞对定位直接合并。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 野生型和突变细胞分别接受溶剂或 SB216763；细胞对结构与工程组织功能分开检查。
- 测试范围
- 细胞对主要结果汇集 3–5 次独立分化；主要 C98 克隆，关键结构结果另以 C93 复核，非多供者队列。
- 参照体系
- 同基因背景野生型及各基因型溶剂条件。
- 研究结果
- 第 9 天突变组织钙波速度由 10.7±3.3 增至 18.1±4.8 cm/s；部分连接定位改善，PKP2 和 N-cadherin 未恢复；野生型细胞对出现结构不良变化。
适用条件与研究局限
- 本次主要疾病变异为 PKP2R413X。
- 第 6 天未见同样钙波改善。
- 细胞对、单层和工程组织的结果不完全一致。
- 未进行患者疗效、跨实验室或监管资格验证。
来源与原文
- Spatiotemporal cell junction assembly in human iPSC-CM models of arrhythmogenic cardiomyopathy原始研究 · Stem Cell Reports · 2023-08-17