长期培养卵巢癌类器官的 6 种药物筛选与 RAD51 修复功能检测
在同一类器官库中比较药物反应、照射后 RAD51 焦点和临床无铂间期。
用途与模型
- 研究用途
- 研究卵巢癌治疗反应差异，以及基因组评分与功能检测的对应。
- 模型与细胞来源
- 37 个长期培养模型来自 31 名患者；药筛 29 个，初治卡铂临床对应 9 个，RECAP 分析 23 个。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- BME2 培养；96/384 孔 ATP 药筛与 6 孔板照射、石蜡切片免疫荧光。
材料与平台
- 培养与身份
- 肿瘤组织或腹水消化后，每滴接种 10,000–20,000 个细胞，70% BME2 覆盖培养液。长期标准为连续扩增超过 8 代、冻存复苏后能生长；STR 与原肿瘤比较身份。
- 药筛数量和条件
- 75–150 µm 类器官；96 孔每孔 200 个、100 µL 培养液和 2% BME2，384 孔每孔 50 个、20 µL 和 10% BME2。处理液去除 Primocin、Y-27632、N-乙酰半胱氨酸。
- 药物与检测
- 接种 30 分钟后给予递增浓度的卡铂、紫杉醇、多柔比星、吉西他滨、奥拉帕利或尼拉帕利，1 周后 CellTiter-Glo 3D 测 ATP；至少 2 次独立生物学重复。未加药作归一化参照，10 µM staurosporine 作阳性对照。
- RECAP 照射
- 75–150 µm 类器官在 6 孔板 BME2 中生长；换 OBM 后接受 5 Gy X 射线（130 kV、5 mA），恢复原培养液，2 小时及 6–24 小时取材。3% PFA、4°C 固定至少 3 小时后石蜡包埋。
- RAD51 量化
- 4 µm 切片检测 Cyclin A2 与 RAD51，QuPath 及 Cellpose/Stardist 识别类器官和细胞核，只统计 Cyclin A2 阳性核内 RAD51 焦点。用未照射、2 小时和 24 小时指标作 PCA，以 PC1 = -0.5 为分类阈值。
测量指标与分析
- 相对 ATP 活力
- 浓度—反应曲线 AUC 与标准化分数
- Cyclin A2 阳性核内 RAD51 焦点
- RECAP 主成分分类
- 无铂间期
药筛 AUC 作标准化比较；孔板微型化在 15 个模型中对照。RECAP 分类与 GIScar 评分、模型药敏及患者无铂间期分别比较。
研究设计与结果
实验条件比较；临床关联研究
- 研究设计
- 同一 15 个模型比较 96 孔与 384 孔测试。
- 测试范围
- 15 个卵巢癌类器官模型。
- 参照体系
- 每孔 200 个模型的 96 孔体系与每孔 50 个模型的 384 孔体系。
- 研究结果
- 药物反应 Spearman 相关系数 0.83，p=0.002。
适用条件与研究局限
- 只有所测 15 个模型完成孔板形式比较。
实验条件比较；临床关联研究
- 研究设计
- 回顾性比较初治模型卡铂反应和对应患者无铂间期。
- 测试范围
- 9 个未化疗高级别浆液性癌模型；5 耐药、4 敏感。
- 参照体系
- 模型未加药条件；患者最后一周期卡铂至复发的实际间隔。
- 研究结果
- 两组中位无铂间期 1.61 与 6.80 个月，p=0.06；按患者无铂间期 6 个月分组比较药敏 p=0.38。
适用条件与研究局限
- 小样本且未达到统计显著。
- 长期培养成功率低、测试时间长；2 个敏感模型对应早期远处复发。
- RECAP 与 GIScar 有关联，但两者未关联本队列模型 PARP 抑制剂或卡铂药敏；实际患者 PARP 抑制剂疗效比较不足。
来源与原文
- Long-term patient-derived ovarian cancer organoids closely recapitulate tumor of origin and clinical response原始研究 · Journal of Experimental & Clinical Cancer Research · 2025-10-07