OPTN 变异视网膜类器官的 LC3 与凋亡干预评价
变异组内层 LC3 斑点和活化 caspase-3 增加；雷帕霉素处理降低两类标志；未处理变异组的 OTX2 光感受器数量未显著减少。
用途与模型
- 研究用途
- 在具有同基因背景对照的人源视网膜组织中，评价自噬相关药物对退化标志的影响。
- 模型与细胞来源
- OPTN(E50K)患者 iPSC/校正对照与 H7/H7(E50K)两对来源的约 2.5 月视网膜类器官。
- 方法版本
- 2020-06-11 原研究相关主文
- 实验形式
- 三维类器官；用 2 μM 雷帕霉素处理 24 小时后，进行组织染色与分层图像定量。
材料与平台
- 模型身份
- 两对同基因背景细胞系，共 4 个细胞系。
- 药物干预
- 雷帕霉素 2 μM，处理 24 小时，设变异未处理和同背景对照。
- 分层检测
- 内外层 LC3 斑点与活化 caspase-3；BRN3/OTX2 用于不同细胞组分。
测量指标与分析
- LC3 斑点数量
- LC3 斑点大小/总面积
- 活化 caspase-3
- 内层/外层位置
- 神经节/光感受器标志
按组织层次和细胞组分定量，分别比较变异、同背景对照和药物处理。
研究设计与结果
方法可行性研究
- 研究设计
- 同背景对照、OPTN(E50K)未处理与变异加雷帕霉素；内层与外层。
- 测试范围
- 图 7 三次独立分化，每次使用四条细胞系；不与 2D 形态或 H7 电生理重复混用。
- 参照体系
- 同背景对照、OPTN(E50K)未处理与变异加雷帕霉素；内层与外层。
- 研究结果
- 变异组内层 LC3 斑点和活化 caspase-3 增加；雷帕霉素处理降低两类标志；未处理变异组的 OTX2 光感受器数量未显著减少。
适用条件与研究局限
- LC3 积聚是静态图像指标，未称完整自噬通量。
- 药物结果限定三维标志变化，不声称恢复全部二维形态或电生理。
- 组织内层药物标志与分离细胞电生理分别评价，两个实验体系的样本不能合并。