肝微反应器的自动分泌标志物与对乙酰氨基酚反应评价
把可更换磁珠的电化学免疫传感器接入人原代肝细胞微反应器，在多个观察日同时评价分泌功能和存活。
用途与模型
- 研究用途
- 用于体外肝毒性研究中分时检测转铁蛋白、白蛋白，并检验传感器的检测限、复用及与常规检测的一致性。
- 模型与细胞来源
- 人原代肝细胞球状体微反应器；HepG2 球状体仅用于前期检测方式比较。
- 方法版本
- 原论文实际评价版本
- 实验形式
- 原代模型闭环灌流 200 微升/小时；对照、5mM 和 10mM 对乙酰氨基酚，观察 5 天，第 1/3/5 天检测；每项 3 次独立重复。
材料与平台
- 人源模型
- 原代肝细胞球状体，反应器初始细胞量（2.5±0.4）×10^5；原代细胞供者数未明确。
- 药物与观察
- 对乙酰氨基酚 5mM 和 10mM；无药对照；第 1、3、5 天。
- 检测系统
- 磁珠电化学免疫传感器测量转铁蛋白（transferrin，TF）及白蛋白（albumin，ALB），活死染色评价细胞存活；HepG2 阶段以常规免疫测定比较 TF。
测量指标与分析
- 转铁蛋白及白蛋白分泌率（微克/天/10⁶ 个细胞）
- 活死染色存活比例
- 转铁蛋白片上校准范围及检测限
- 同一电极分次检测稳定性
以各标志物校准曲线换算浓度，再结合细胞数量和时间评价分泌率；分开分析传感器性能、细胞系检测比较和原代药物反应。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 原代模型闭环灌流 200 微升/小时；对照、5mM 和 10mM 对乙酰氨基酚，观察 5 天，第 1/3/5 天检测；每项 3 次独立重复。
- 测试范围
- 每项 3 次独立实验；原代模型初始（2.5±0.4）×10^5 细胞；4 次间隔 2 天检测为复用测试，不是 4 位供者。
- 参照体系
- 无药对 5/10mM 对乙酰氨基酚；片上对离片电化学/常规免疫测定；同一电极不同检测日。
- 研究结果
- 片上 TF 检测限 0.03ng/mL，本研究其他两种检测为 0.2ng/mL；10mM 组第 3/5 天分泌和存活下降，5mM 组第 5 天约 80% 存活。
适用条件与研究局限
- 药物结果仅为对乙酰氨基酚示范，不构成广泛肝毒性预测验证。
- 预定日重复测量，不是不间断实时检测。
- HepG2 与原代细胞用途不同；实验重复不能替代供者样本量。