2H4 双测定免疫抑制评价
组合 IL-2 Luc 与 IL-2 Luc LTT，分别观察 T 细胞活化相关信号及细胞分裂受抑的影响。
用途与模型
- 研究用途
- 识别具有不同作用机制的潜在免疫抑制物质，作为药物免疫安全评价的体外证据。
- 模型与细胞来源
- 人 Jurkat T 淋巴细胞系来源的 2H4 报告细胞；两项测定采用同一细胞模型。
- 方法版本
- OECD 444A，2025 年采用、2026 年更正版
- 实验形式
- 两项测定分别分析，再按任一项提示免疫抑制即归为组合阳性；测量的是报告信号和增殖相关影响。
材料与平台
- 细胞模型
- 2H4 人源报告细胞，指南说明可经材料转让协议获取。
- 测量体系
- 荧光素酶报告信号及其内部参照，用于分析活化相关信号和细胞毒性影响。
- 评价物集合
- 扩展评价共 83 种物质，含 46 种药物与 37 种非药物化学品。
测量指标与分析
- IL-2 产生相关报告信号
- 抗有丝分裂作用相关信号
- 两项测定组合的免疫抑制分类
两项结果分别判定后组合。实验室内、实验室间重复性与对参考类别的敏感性、特异性采用不同集合与分母。
研究设计与结果
方法文件报告的验证结果
- 研究设计
- OECD 方法文件汇总的验证与扩展参考分类结果。
- 测试范围
- 验证由牵头实验室与 3 家独立实验室参与。扩展集合 83 种物质；组合性能分别基于 79 种及考虑适用范围后的 76 种。
- 参照体系
- 文献资料划分的免疫抑制参考类别，以及实验室内和实验室间重复分类。
- 研究结果
- IL-2 Luc 重复性为实验室内 80.0%（4/5）、实验室间 80.0%（16/20）；LTT 分别为 100.0%（15/15）和 92.0%（23/25）。79 种物质的组合敏感性为 88.7%（47/53）、特异性为 53.8%（14/26）；76 种物质中敏感性为 90.0%（45/50）、特异性仍为 53.8%（14/26）。
适用条件与研究局限
- 所列性能来自该版 OECD 方法文件汇总的验证资料。
- 总体性能结合药物与非药物化学品，不代表 46 种药物对临床风险的独立预测性能。
- 刺激方式绕过部分早期 T 细胞受体信号，Jurkat 与正常 T 细胞也有差别；需要代谢活化的物质超出适用范围。
- 高疏水性、荧光素酶干扰及检出能力限制会影响解释；组合特异性有限，需要与其他试验一起评价。
工具与相关资料
2026 年 7 月 2 日更正版；验证数字按官方方法文件报告范围引用。
来源与原文
- OECD. Test No. 444A: In Vitro Immunotoxicity: IL-2 Luc and Il-2 Luc LTT Assays. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4. Adopted 25 June 2025; corrected 2 July 2026. doi:10.1787/27b10ba3-en.方法资料 · OECD Guidelines for the Testing of Chemicals · 2025-06-25