人 AT2 与成纤维细胞共培养：囊状表型与达沙替尼反应
将原代肺泡Ⅱ型细胞与肺成纤维细胞共培养，用形态、MUC5B 和 SFTPC 比较达沙替尼的作用。
用途与模型
- 研究用途
- 评价药物对成纤维细胞诱导的异常肺泡上皮分化和分泌表型的影响。
- 模型与细胞来源
- 人肺泡Ⅱ型细胞（alveolar type 2 cell，AT2）经 HT2-280 分选；与不同供者原代肺成纤维细胞按 1:1 共培养，另设 AT2 单独培养及 MRC5 参照。
- 方法版本
- 2024 年 21 天共培养、达沙替尼持续给药版本
- 实验形式
- Matrigel 三维培养 21 天；每孔 5000 个 AT2 细胞，共培养加入等量成纤维细胞。
材料与平台
- 药物安排
- 成纤维细胞预先用达沙替尼处理，后续共培养从接种时持续使用 200 nM 至第 21 天；设置无成纤维细胞和未加药对照。
- 机制刺激
- 白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）从接种日开始持续加入，浓度 1 或 10 ng/mL；与未刺激模型比较。
- 终点和分析
- 类器官形态与直径、黏蛋白 5B（MUC5B）和表面活性蛋白 C（SFTPC）染色及转录表达；MUC5B 染色强度按类器官面积归一化。
测量指标与分析
- 囊状类器官比例
- 类器官直径
- MUC5B 染色及表达
- SFTPC 与 STAT3 磷酸化
分别比较 AT2 单独培养和原代成纤维细胞共培养中的加药与未加药组，计算囊状类器官比例、直径及 MUC5B 染色，比较 SFTPC 表达和 STAT3 磷酸化。各项指标用于描述相应条件下的药物反应。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 3 名成纤维细胞供者的共培养表征，结合 IL-6 刺激及达沙替尼比较。
- 测试范围
- 药物图汇总 3 次独立实验；单细胞分析含 3 名不同背景的成纤维细胞供者。
- 参照体系
- AT2 单独培养、原代成纤维细胞共培养、MRC5 参照、相应未加药和 IL-6 对照。
- 研究结果
- 原代成纤维细胞诱导囊状和 MUC5B 阳性表型；达沙替尼减少该表型及 STAT3 磷酸化，未逆转 SFTPC 降低。AT2 单独培养中，药物提高 SFTPC、降低 MUC5B 表达，形态和直径没有相应变化。
适用条件与研究局限
- 供者细胞取自无病变区域，供者疾病背景不同；包括肺癌、伴慢性阻塞性肺疾病的肺癌及特发性肺纤维化背景。
- 二维扩增及培养液成分影响成纤维细胞激活状态。
- 部分细胞互作来自单细胞算法预测，刺激实验检测了生长分化因子和白血病抑制因子对 IL-6 分泌的影响。
来源与原文
- Co-culture of human AT2 cells with fibroblasts reveals a MUC5B phenotype: insights from an organoid model.原始研究 · Molecular Medicine · 2024-11-23