视网膜类器官的 CXCR4 阻断与细胞定位成像
用 AMD3100 处理 H9 人胚胎干细胞来源视网膜类器官，比较分化标志和细胞层次分布。
用途与模型
- 研究用途
- 药理干预对人源视网膜发育的影响及模型与动物结果的对应比较。
- 模型与细胞来源
- H9 人胚胎干细胞来源视网膜类器官，在分化第 6–10 周分析。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- AMD3100 与 PBS 对照；类器官切片免疫成像和 ImageJ 面积定量。
材料与平台
- H9 人胚胎干细胞与视网膜类器官
- 原研究使用 H9 细胞建立 3D 视网膜结构，包含神经节细胞、无长突细胞与光感受器前体相关标志。
- AMD3100
- 药物浓度为 2 μg/mL；实验方法所列加入时间为分化第 10 天，结果章节记为第 3 天。
- 细胞及轴突标志
- MCM2、TUJ1、HuD、BRN3、AP-2α、OTX2、RECOVERIN 和 NEFL；DAPI 为核染色。
测量指标与分析
- 类器官形成数量和直径
- 细胞标志与 DAPI 的相对面积
- 神经节细胞等在类器官不同区域的定位
- NEFL 阳性神经突长度与异常方向
每组至少分析 10 个类器官，每个类器官至少选取 3 个视野，用 ImageJ 定量细胞标志与 DAPI 的重叠面积，并计算相对于 DAPI 的比例。
研究设计与结果
实验条件比较；药物集评价
- 研究设计
- 分化第 6、8、10 周的 AMD3100 与 PBS 组比较。
- 测试范围
- H9 来源类器官；定量方法每组至少 10 个类器官。
- 参照体系
- 同期 PBS 对照。
- 研究结果
- AMD3100 组形成数量减少、直径增加；部分神经细胞标志比例与层次分布改变，MCM2 比例未显著改变。
适用条件与研究局限
- 原
- 文
- 结
- 果
- 与
- 实
- 验
- 方
- 法
- 记
- 载
- 的
- 药
- 物
- 加
- 入
- 时
- 间
- 不
- 同
- ，
- 分
- 别
- 为
- 分
- 化
- 第
- 3
- 天
- 和
- 第
- 1
- 0
- 天
- ；
- 人
- 源
- 实
- 验
- 采
- 用
- 单
- 一
- H
- 9
- 细
- 胞
- 系
- 。
实验条件比较；药物集评价
- 研究设计
- 对照药理阻断后人源类器官与斑马鱼视网膜的形态和细胞标志。
- 测试范围
- 人源类器官和斑马鱼分别按研究选择的发育阶段分析。
- 参照体系
- 各体系内的 PBS 对照。
- 研究结果
- 神经节及无长突细胞减少、神经突方向异常等变化具有相似性；光感受器前体异常聚集仅在类器官中观察到。
适用条件与研究局限
- 类
- 器
- 官
- 与
- 斑
- 马
- 鱼
- 的
- 结
- 构
- 和
- 微
- 环
- 境
- 不
- 同
- ，
- 当
- 前
- 比
- 较
- 覆
- 盖
- 选
- 定
- 发
- 育
- 阶
- 段
- 。
来源与原文
- Comparison of the Response to the CXCR4 Antagonist AMD3100 during the Development of Retinal Organoids Derived from ES Cells and Zebrafish Retina原始研究 · International Journal of Molecular Sciences · 2022-06-25