N1303K 肠类器官的 CFTR 调节药膨胀检测
通过 60 分钟 forskolin 刺激与连续成像，比较不同 CFTR 调节药对患者肠类器官功能的影响。
用途与模型
- 研究用途
- 评价 N1303K 及不同第二等位基因背景下的 CFTR 调节药反应。
- 模型与细胞来源
- 4 名 N1303K 携带者的直肠活检来源模型；另有 F508del 纯合及健康供者对照。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- Matrigel 三维培养、96 孔药物检测和荧光连续成像。
材料与平台
- 培养材料
- 培养液包含 Wnt-3A、Noggin、R-spondin-1 条件培养液及 Advanced DMEM/F12，加入 B27、mEGF、N-乙酰半胱氨酸、nicotinamide 等；模型在 Matrigel 中扩增，每周传代、每 2–3 天换液。
- 校正剂与增强剂
- 检测前 1 天在 96 孔板中加入 VX-809、VX-661 和/或 VX-445，各 3.5 µM；VX-770 为 3.5 µM，在 forskolin 刺激时同步加入。
- 刺激与成像
- 检测前用 0.85 µM Calcein 染色 30 分钟；forskolin 为 0.128 或 5 µM，观察 60 分钟，每 10 分钟成像。使用 Axio Observer 7 显微镜及 ImageJ/SigmaPlot 分析。
- 功能与重复
- 以起始投影面积 100% 归一化，计算 60 分钟面积增长曲线的 AUC；3 次生物学重复，每次 4–6 个技术重复。健康和 F508del 模型用于参照。
测量指标与分析
- 归一化投影面积变化
- 60 分钟膨胀曲线 AUC
- 不同基因背景与组合反应
各条患者模型分别比较药物与 forskolin 浓度；AUC 为任意单位，统计采用非配对双侧 t 检验，未将不同等位基因模型合并为单一反应。
研究设计与结果
实验条件比较；临床关联研究
- 研究设计
- 4 条 N1303K 患者模型比较单药、双药和 ETI 三药组合。
- 测试范围
- N1303K/2143delT 2 名，N1303K/3821delT 和 N1303K/G461E 各 1 名；生物学及技术重复按模型统计。
- 参照体系
- F508del 纯合及健康供者，forskolin 刺激和各调节药条件。
- 研究结果
- 5 µM forskolin 下 4 条 N1303K 模型均有 ETI 膨胀反应；低刺激下不同等位基因反应不同。
适用条件与研究局限
- 膨胀量由二维投影面积计算。
- 模型来自肠道，未直接测试肺组织功能。
实验条件比较；临床关联研究
- 研究设计
- 患者 1 接受 ETI 前后比较临床指标与直肠离体电流。
- 测试范围
- 1 名 19 岁 N1303K/2143delT 男性，治疗 3 个月。每次取 3 份活检；离体电流的健康对照为 18 名、F508del 纯合对照为 5 名，与类器官培养对照分别计数。
- 参照体系
- 治疗前后直肠电流和肺功能、体重、汗液电导率。
- 研究结果
- forskolin 电流 4.33→8.33 µA/cm²，FEV1 预计值比例 84.1%→88.8%；汗液电导率未改善。
适用条件与研究局限
- 临床观察只有 1 名患者，没有盲法或随机比较。
- 离体组织电流与类器官膨胀为不同检测；治疗后电流仍低于健康参照。
来源与原文
- Comprehensive Assessment of CFTR Modulators’ Therapeutic Efficiency for N1303K Variant原始研究 · International Journal of Molecular Sciences · 2024-02-27