C9orf72 转录本选择性与外周血细胞反应检测
分别检测 V3 与全部 C9orf72 转录本，再用 PBMC 补充短期活力及细胞因子反应。
用途与模型
- 研究用途
- 评价 C9orf72 靶向寡核苷酸的转录本选择性和人源细胞反应。
- 模型与细胞来源
- 一个 C9orf72 相关 ALS 患者 iPSC 分化的脊髓运动神经元；另用 3 名供者 PBMC。
- 方法版本
- 2022 年 WVE-004 在患者运动神经元和 3 供者 PBMC 中的版本
- 实验形式
- 神经元 12 孔培养板；PBMC 每孔 400000 细胞、150 μL，处理 24 小时。
材料与平台
- 神经元处理
- 冻存细胞第 0 天解冻，第 7 天自由摄取加入 WVE-004 或非靶向寡核苷酸，最高 10 μM，第 14 天取样。
- 转录本检测
- TaqMan 分别测 V3、全部 C9orf72 与 HPRT1，提取 RNA 后定量 PCR。
- PBMC 处理
- WVE-004 0.1–30 μM、PBS 阴性对照及 ODN 2216 1 μg/mL 阳性对照，24 小时后上清做 Luminex 多因子检测，细胞做 CellTiter-Glo ATP 活力。
测量指标与分析
- V3 与全部 C9orf72 转录本的相对表达
- V3 浓度反应及 IC50
- PBMC ATP 活力
- PBMC 上清细胞因子浓度
神经元表达按 HPRT1 归一化，分别计算 V3 与全部转录本浓度反应；PBMC 细胞因子用 5 参数曲线定量。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 同一患者背景比较 WVE-004 及非靶向寡核苷酸；独立 PBMC 检测加入炎症阳性及阴性对照。
- 测试范围
- 运动神经元 1 个患者细胞系，V3 实验 3 个重复、全部转录本 2–3 个重复；PBMC 3 名供者。
- 参照体系
- 神经元非靶向寡核苷酸；PBMC 的 PBS 与 ODN 2216。
- 研究结果
- V3 IC50 为 201.7 nM；10 μM 时 V3 下降 98.1%，全部转录本下降 65.7%。PBMC 最高 30 μM 时部分细胞因子高于 PBS、低于 ODN 2216，ATP 活力在测试浓度内高于论文判定细胞毒性的 80% 阈值。
适用条件与研究局限
- 全部转录本检测包含 V3。
- 转录本选择性来自单一患者背景。
- PBMC 为 24 小时处理，最高剂量部分细胞因子增加。
来源与原文
- Preclinical evaluation of WVE-004, aninvestigational stereopure oligonucleotide forthe treatment of C9orf72-associated ALS or FTD原始研究 · Molecular Therapy. Nucleic Acids · 2022-04-20