C9orf72 两类重复 RNA 靶向与神经元剪接、应激比较
分别降低两个方向的重复 RNA，比较 TDP-43 相关 RNA 指标、蛋白定位和谷氨酸损伤。
用途与模型
- 研究用途
- 区分 C9orf72 不同转录方向的作用，并评价 RNA 靶向干预。
- 模型与细胞来源
- C9orf72 患者及无神经疾病对照 iPSC 分化的脊髓神经元。
- 方法版本
- 2023 年患者 iPSC 脊髓神经元的单次 ASO 及 5–20 天检测版本
- 实验形式
- 分化第 46 天单次 5 μM ASO，第 49 天换去含药培养液，之后观察至给药后第 5、10、15、20 天。
材料与平台
- 靶向条件
- G4C2 ASO 619251、G2C4 ASO 813214 及乱序 ASO 676630，分别或联合使用；培养液随后每 2–3 天更换。
- RNA 检测
- 定量 PCR 测两类重复 RNA、TDP-43 相关转录本、隐蔽外显子及截短 STMN2，以 GAPDH 归一化。
- 应激条件
- 人工脑脊液含 0 或 10 μM 谷氨酸，4 小时；末 30 分钟加入 1 μM PI 及核染料，另设 Alamar Blue 检测。
测量指标与分析
- 两类重复 RNA 含量
- TDP-43 相关基因表达与异常剪接
- 核与胞质 TDP-43 分布
- PI 阳性细胞核比例
- Alamar Blue 活力
图像分析采用自动化或对条件设盲，按细胞系汇总；PCR 按 GAPDH 归一化，分别对表达与剪接面板比较。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 在已出现功能相关异常的患者神经元中，比较两类单 ASO、双 ASO 及乱序对照，分别检测 RNA 恢复和谷氨酸损伤。
- 测试范围
- 20 天单 ASO 表达/剪接面板为 3 个患者与 3 个对照细胞系；15 天联合面板为 4 个患者与 4 个对照细胞系。
- 参照体系
- 两类靶向 ASO、乱序 ASO 及无神经疾病对照。
- 研究结果
- 第 5 天对应重复 RNA 下降；第 15 和 20 天 G2C4 ASO 改善 TDP-43 相关表达与剪接，G4C2 没有同等恢复。两类 ASO 均减轻谷氨酸死亡，联合未增加相应指标获益。
适用条件与研究局限
- RNA 功能恢复与谷氨酸保护表现不同。
- 检测日为单次给药后的观察时间，药物第 49 天已换去。
- 显著改善发生于后期观察，早期 5/10 天未充分恢复。
来源与原文
- G2C4 targeting antisense oligonucleotides potently mitigate TDP-43 dysfunction in human C9orf72 ALS/FTD induced pluripotent stem cell derived neurons原始研究 · Acta neuropathologica · 2023-11-29