按药物作用机制确定需要评价的免疫风险
FDA 于 2023 年 6 月发布的免疫毒性正式指南，将非预期免疫抑制、免疫刺激和超敏反应纳入药物安全评价。文件适用于小分子药物、寡核苷酸以及部分生物药，例如生物技术来源的治疗蛋白；细胞与基因治疗、含佐剂疫苗和血液制品另有评价范围。
评价首先整合药物的药理性质、目标患者、已有毒性和临床资料，以及靶点在免疫系统中的作用。若这些信息提示具体风险，再选择相应的免疫功能研究。对免疫调节药物，预期药理作用过强，以及对其他免疫细胞或功能的影响，都需要在选用方法时考虑。
人源细胞测定观察细胞因子释放和免疫激活
文件讨论的不良免疫刺激包括过量细胞因子释放、非目标组织的免疫介导损伤，以及靶细胞快速清除引起的广泛免疫激活。药物是直接作用于某类免疫细胞，还是通过免疫调节通路间接改变反应，会影响应该采用哪种试验。
细胞因子释放测定可以使用人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）、全血等体系，也可根据问题考虑内皮细胞与 PBMC 共培养、肿瘤与内皮细胞共培养或患者来源细胞。这些模型具有不同的细胞组成，能够提供不同条件下的免疫反应信息。
细胞增殖和活化测定则关注 T 细胞是否被激活、是否增殖，以及部分抗原呈递细胞的反应。指南列举流式细胞术评价活化标志等方法。指南建议按药物机制和可能受影响的细胞选择指标，以便测量对应的功能变化。
补体活化和细胞杀伤测定回答不同问题
补体依赖性细胞毒性和抗体依赖的细胞介导细胞毒性测定，用于观察由补体或抗体相关相互作用引起的细胞裂解。补体活化测定则可以测量血清中的 C3a、C5a 等活化片段。细胞是否被杀伤与补体是否被激活，是不同的测量信息。
这些方法的意义取决于产品作用方式和需要识别的风险。指南同时提出，新技术可在有适用性依据时被考虑，其中包括微生理系统。方法名称相同，也仍需说明试验中的细胞、反应体系和检测终点如何对应当前产品。
皮肤致敏与全身超敏反应采用不同证据
对局部用药的皮肤致敏风险，FDA 提出可考虑将计算、无细胞化学测定和体外试验组合使用。组合证据需要能够预测人的皮肤致敏，并达到与既有体内方法相近的准确性。指南引用的经济合作与发展组织（Organisation for Economic Co-operation and Development，OECD）方法分别涉及蛋白结合、细胞应激和树突状细胞活化等环节。
全身超敏反应的情况不同。文件指出，当时还没有能够充分评价这一风险的标准非临床测定；根据具体问题采用合适方法或综合证据，可以提供风险信息。对某些非典型过敏反应，体外补体活化、肥大细胞或嗜碱性粒细胞活化测定可能有价值。
适用性、对照和明确终点共同支持结果解释
指南建议试验有适当的阳性和阴性对照，并产生清楚、可测量的结果。申办方需要提供方法适用于当前用途的依据，例如验证资料或相关文献。评价的重点是试验能否识别该药物可能带来的免疫风险，以及结果如何用于进一步的风险管理。
如果产品已经清楚显示某种免疫激活危险，或者一项测定已识别相关信号，再换另一种格式重复识别同一危险，可能没有必要。细胞因子释放阳性结果会结合反应的幅度、持续时间和涉及的细胞因子等因素解释，并影响后续开发中的剂量与监测安排。
指南以可直接引起细胞因子释放的 CD3 双特异性分子为例，说明某些免疫激活危险在研究前就已明确。是否追加测定，需要看已有资料还留下什么问题，以及新的试验能提供哪一类风险信息。