NAMs新方法学前沿

电极与三维肿瘤支架的阻抗药物反应比较

在电极上的 U-87 MG 和 CaCo-2 三维球状体中测多频阻抗,并以染色检查部分 Nutlin-3a 反应的生物学含义。

用途与模型

研究用途
追踪三维肿瘤培养物的整体电信号及药物相关变化。
模型与细胞来源
U-87 MG GFP 表达细胞系和 CaCo-2 结直肠腺癌细胞系;16 电极平台,穹顶支架支持细胞团块、塔状支架保护参照电极;无微流体流路。
方法版本
2025 年 U-87 MG/CaCo-2 球状体多频阻抗与染色比较
实验形式
球状体形成 48 或 96 小时后,Nutlin-3a 30 µM 处理 3/24 小时;96 小时模型另测 10/15/20 µM。频率 10 Hz–100 kHz,重点 3.6/10/27.7 kHz。CaCo-2 形成 96 小时后 15 µM 索拉非尼处理 3/24 小时。

材料与平台

培养与电学
三维微支架、多电极阵列及培养腔室;外部或受保护的内部铂参照电极,PalmSens EmStat4S/PSTrace 5.9。
药物
Nutlin-3a 和索拉非尼。
互补检测
EthD-1 膜完整性、p53 染色和共聚焦图像;细胞去除后无细胞基线。

测量指标与分析

  • 多频阻抗及归一化细胞指数
  • 二维与三维条件中响应电极比例
  • 3/24 小时 EthD-1 和 p53 阳性比例
  • 7 天培养物核心死亡相关信号

以无细胞及处理前信号为参照,按形成时间、药物浓度和处理时间比较阻抗;用染色和结构观察解释其对应关系。研究以 3 次独立实验的均值±标准差报告多数结果,电极和球状体子集另列数量。

研究设计与结果

实验条件比较

研究设计
比较二维与三维培养中具有显著阻抗变化的电极比例。
测试范围
二维 16、三维 26 个电极。
参照体系
48 小时培养后的二维和支架三维条件。
研究结果
响应电极 13%±4% 与 81%±10%。

适用条件与研究局限

  • 电极为测量单元,模型为细胞系。

实验条件比较

研究设计
比较 Nutlin-3a 处理的阻抗及染色时间变化。
测试范围
96 小时 U-87 MG 三维模型;30 µM、3/24 小时。
参照体系
处理前或无药参照及不同处理时间。
研究结果
3 小时阻抗下降但 EthD-1/p53 增加未显著;24 小时 EthD-1 约 48.6%±6.7%、p53 约 35.6%±6.8%。

适用条件与研究局限

  • 阻抗可受细胞脱离、接触和结构变化影响,3 小时信号未与死亡染色同步。
  • 整体信号不解析单细胞,未作等效电路拆分。

实验条件比较

研究设计
在第二细胞系模型评价药物相关阻抗响应。
测试范围
CaCo-2 三维培养 96 小时,15 µM 索拉非尼。
参照体系
处理前与处理 3/24 小时。
研究结果
24 小时归一化细胞指数下降约 37%。

适用条件与研究局限

  • 细胞指数降低约 37%,这一指标描述培养物的电学变化。
  • 未纳入患者来源模型或完整免疫与基质共培养。

来源与原文

  1. High-throughput impedance monitoring in 3D tumor cultures: a multiplex, microfluidic-free platform for drug screening原始研究 · Lab on a Chip · 2025-07-17

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