改良 SEAM 视网膜类器官的分期与结构检查
采用 SEAM（self-formed ectodermal autonomous multi-zone）体系形成 H9 视网膜类器官，结合形态、细胞类型和超微结构检查早晚阶段及共同形成的色素上皮。
用途与模型
- 研究用途
- 为候选分子和药物研究选择细胞类型及观察时间；本论文未做药物筛选。
- 模型与细胞来源
- H9 人胚胎干细胞来源视网膜类器官，可带相邻色素上皮与睫状缘样区域。
- 方法版本
- 原论文实际模型质量评价版本
- 实验形式
- 改良 SEAM 诱导后分离悬浮培养，以分离日为第 0 天，结合早晚阶段及长期单独维持比较。
材料与平台
- 细胞模型
- H9 人胚胎干细胞、神经视网膜类器官及色素上皮。
- 检查工具
- 明场、免疫荧光、整体染色三维重建、透射电镜与色素上皮荧光微球吞噬检测。
测量指标与分析
- 球体面积与神经上皮厚度
- Ki67 及各视网膜细胞标志
- 内外节样结构与突触形态
- 色素上皮标志、超微结构和微球吞噬
按悬浮时间和细胞类型分别统计；分化质量、数量及功能检测各有实际分母。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 改良 SEAM 诱导后分离悬浮培养，以分离日为第 0 天，结合早晚阶段及长期单独维持比较。
- 测试范围
- 大小 10 个、厚度 15 个类器官，均来自 3 次独立实验；BRN3 比较 7 个独立重复；主要细胞系为 H9。
- 参照体系
- 原 SEAM 诱导、不同悬浮年龄及是否保留色素区域。
- 研究结果
- 类器官呈现早晚分化阶段；BRN3 阳性比例第 5 周 36.32% 至第 8 周 11.72%；可形成光感受器内外节及共同色素上皮。
适用条件与研究局限
- 效率主要在 H9 检验，其他细胞系尚需验证。
- 后期仍加维甲酸等，不能描述成全程无外加因子。
- 结构与标志未构成完整光功能或药物预测验证；色素上皮电阻未测。
来源与原文
- Generation and Staging of Human Retinal Organoids Based on Self-Formed Ectodermal Autonomous Multi-Zone System原始研究 · Frontiers in Cell and Developmental Biology · 2021-09-22