小细胞肺癌与肺成纤维细胞共培养的化疗后再生长评价
在微珠支架上共培养小细胞肺癌和肺成纤维细胞，化疗处理后连续观察活细胞信号与再生长。
用途与模型
- 研究用途
- 研究成纤维细胞及其分泌成分对化疗后残留和恢复的影响。
- 模型与细胞来源
- H526 小细胞肺癌细胞与正常供者肺成纤维细胞；另以 H1963/H82 测试模型生长。
- 方法版本
- 原研究首次发表版本
- 实验形式
- 约 100 µm 海藻酸微珠、旋转生物反应器及玻璃底 96 孔板。
材料与平台
- 支架与细胞比例
- 3% 海藻酸溶液以 100 mM BaCl₂ 交联，微珠经胶原及多巴胺处理；先加入成纤维细胞，再按 4:1 的成纤维细胞/肿瘤细胞比例共培养。
- 化疗及观察
- 模型培养约 7 天后，按各模型测得的联合 IC50 加入顺铂和依托泊苷，72 小时后移除；以开始加药当天为第 0 天，随后每隔约 7 天检测至第 38 天。
- 活细胞与分泌测量
- Calcein-AM 1:1000 染色并成像，以 Otsu 阈值法计算荧光；配合 CellTiter-Glo ATP 活力检测与培养上清分泌因子测量。
测量指标与分析
- 活细胞荧光信号
- 整孔 ATP 活力
- 再生长时间
- 细胞空间分布
- 培养上清分泌因子
比较单独培养、直接共培养及成纤维细胞条件培养液；活力信号与细胞定位分别测量，分泌因子按相应 ATP 发光值归一化。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- H526 单独培养、肺成纤维细胞共培养和条件培养液三组，在相同化疗处理后连续观察。
- 测试范围
- 化疗后再生长实验采用 H526；每项处理和检测设置 3 次重复，成纤维细胞来自 1 名正常供者。
- 参照体系
- H526 单独培养；直接共培养与条件培养液并行比较。
- 研究结果
- 以开始加药当天计时，共培养模型约第 31 天重新形成较大肿瘤细胞团，单独培养约第 38 天出现；条件培养液也增加第 31 天活细胞信号。
适用条件与研究局限
- Calcein-AM 与 ATP 为整体细胞信号，共培养中同时包含肿瘤细胞和成纤维细胞。
- 模型由既有癌细胞系搭建，患者组织用于标志物比较，没有对应临床药敏验证。
来源与原文
- Development of a small cell lung cancer organoid model to study cellular interactions and survival after chemotherapy原始研究 · Frontiers in Pharmacology · 2023-08-07