视网膜母细胞瘤类器官药筛与正常视网膜毒性比较
以肿瘤类器官初筛和浓度—反应检测选出候选，再比较肿瘤与正常视网膜类器官的增殖和凋亡。
用途与模型
- 研究用途
- 寻找视网膜母细胞瘤的药物再利用候选，并比较其在肿瘤和正常视网膜模型中的作用。
- 模型与细胞来源
- 5 个患者来源肿瘤类器官：4 个 RB1 缺陷、1 个 MYCN 扩增；正常参照为 KhES-1 人胚胎干细胞来源视网膜类器官。
- 方法版本
- 2023 年 133 种药物初筛、舒尼替尼扩展验证版本
- 实验形式
- 96 孔初筛、384 孔浓度—反应复筛和三维模型免疫染色。
材料与平台
- 初筛
- 133 种肿瘤药物；3 个代表性模型，10 μM、72 小时；Hoechst 33342 与 ethidium homodimer-1 成像。
- 复筛
- 11 种候选进入 6 点浓度系列，72 小时 ATP 发光测定；8 种得到 IC50、Emax 和曲线斜率。
- 肿瘤与正常比较
- RB170、RB654 与第 65–70 天正常视网膜类器官；舒尼替尼 4 或 6 μM，以及对应拓扑替康、美法仑浓度处理 24 小时。
- 作用指标
- 细胞周期、RXRG/Ki67 双标、裂解型 caspase-3 染色；低毒性浓度下转录组与蛋白检测。
测量指标与分析
- 生长速率校正的抑制指标 GR
- ATP 活力 IC50、Emax 和曲线斜率
- RXRG+Ki67+ 占 RXRG+ 细胞比例
- 裂解型 caspase-3 阳性细胞比例
- 细胞周期分布
初筛用给药前后活细胞面积成像校正模型生长速率；复筛拟合 ATP 浓度—反应曲线。RXRG 阳性细胞中计算增殖比例；肿瘤及正常模型中分别以全部核染细胞为分母计算凋亡标志阳性比例。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 3 个模型初筛、5 个模型扩展药物比较；2 个肿瘤模型与正常视网膜模型在对应浓度下比较 24 小时凋亡。
- 测试范围
- 5 个肿瘤模型；细胞染色来自 3 次独立实验。毒性比较每个条件使用 6 个正常类器官或 6 个肿瘤培养胶滴。
- 参照体系
- 溶剂对照及卡铂、美法仑、拓扑替康；正常 hESC 来源视网膜模型。
- 研究结果
- 舒尼替尼在 3 个初筛模型中的 IC50 均低于 10 μM，并在扩展模型显示较强抑制。正常类器官 4/6 μM 舒尼替尼后 CC3 阳性比例约 6.57%/9.15%，低于本次对应浓度的拓扑替康和美法仑。
适用条件与研究局限
- 正常参照来自 1 株 hESC，测试为第 65–70 天视网膜类器官。
- 模型数量和药物作用时间有限，体内给药及视网膜安全性仍需后续研究。
- 各药浓度按肿瘤模型的反应设定，并非统一质量或摩尔浓度比较。
来源与原文
- Sunitinib efficacy with minimal toxicity in patient-derived retinoblastoma organoids原始研究 · Journal of Experimental & Clinical Cancer Research : CR · 2023-02-01