视网膜类器官与离体组织的 AAV 细胞偏好比较
在类器官和离体成人视网膜中比较 AAV 载体、启动子与 GFP 细胞定位。
用途与模型
- 研究用途
- 为视网膜基因递送选择载体与目标细胞。
- 模型与细胞来源
- 健康 LUMC0004 iPSC 视网膜类器官与 3 名成人供者离体视网膜；结构观察另有 CRB1 患者背景。
- 方法版本
- 2019 年约 220 天类器官与 3 成人供者视网膜递送版本
- 实验形式
- 类器官约 7.5 个月时处理 14 天；成人组织开展剂量选择与配对载体比较。
材料与平台
- 载体组合
- AAV9-CMV-GFP、AAV5-CMV-GFP、ShH10Y445F-CMV-GFP 和 ShH10Y445F-RLBP1-GFP。
- 类器官给量
- 每 2 个类器官总计 10¹⁰基因组拷贝，14 天后固定和成像。
- 成人组织比较
- 主比较为 3×10¹⁰基因组拷贝；另有 AAV9 3×10¹¹的滴定条件。
- 检测标志
- GFP、Müller 胶质细胞标志 LHX2/SOX2/SOX9 及感光细胞标志 recoverin；同成像强度比较。
测量指标与分析
- GFP 阳性细胞占总细胞比例
- 平均荧光信号
- 不同视网膜核层中的表达比例
- GFP 与目标细胞标志共定位
总细胞分析与外核层/内核层/神经节细胞层分析分别比较；每名供者的 10 幅图像先汇总，再进行供者层面的比较。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 不同血清型及启动子在类器官中比较，再用成人组织检验表达及细胞偏好。
- 测试范围
- 类器官 2 次独立分化，每载体 3–4 个类器官；成人 3 供者，每供者 10 幅图像。
- 参照体系
- AAV5、AAV9 和 ShH10Y445F；CMV 和 RLBP1 启动子；类器官与成人离体组织。
- 研究结果
- 类器官中 AAV5/ShH10Y445F 的胶质细胞表达优于 AAV9；成人总体 GFP 比例 AAV5 14%±5%、AAV9 3%±1%，外核层各载体结果另列。
适用条件与研究局限
- 类器官递送使用健康背景，CRB1 患者类器官用于另一个结构比较。
- 类器官与成人组织的剂量和组织成熟状态不同。
- 主要终点为表达与定位；感光细胞内外节完整性影响离体组织结果。