类器官与 RPE 灌流芯片的药物损伤比较
在灌流环境中组合类器官及 RPE，按药物剂量、组织区域和有无 RPE 比较 PI 与 LAMP2 信号。
用途与模型
- 研究用途
- 研究药物视网膜损伤，并检验组织组成对反应的影响。
- 模型与细胞来源
- 健康供者 iPSC 分化的视网膜类器官和 RPE；4 培养室 PDMS 芯片，底部通道灌流、多孔 PET 膜分隔。
- 方法版本
- 2019 年氯喹与庆大霉素的类器官／RPE 组合芯片版本
- 实验形式
- 每室 27000 个 RPE，之后加入类器官与透明质酸水凝胶；含 RPE 及不含 RPE 条件分别培养。
材料与平台
- 芯片培养
- PET 膜孔径 3 μm、厚 10–20 μm；BRDM 含 100 μM 牛磺酸及 10%FBS，常规灌流 20 μL/h。
- 氯喹条件
- 先在芯片培养 3 天，20 或 80 μg/mL 处理 3 天；方法灌流 30 μL/h，药物图类器官 243–260 天。
- 庆大霉素条件
- 结果与图 8 用 0.5 和 2.5 mg/mL 处理 6 天，比较有无 RPE，示例类器官 202 天。
- 成像检测
- PI 3 μM 及核染料，固定后 LAMP2；ImageJ 按区域测平均 PI 强度、扣除背景，并估算扣除 RPE 后的类器官信号。
测量指标与分析
- 相对 PI 荧光强度
- LAMP2 染色
- 含与不含 RPE 的类器官区域 PI
- 外节样结构和 RPE 功能
PI 先扣除未染色背景，再对各条件对照归一化；通过区域信号估算将 RPE 部分与类器官部分分开。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 两药各设高低剂量；庆大霉素另比较含与不含 RPE 芯片，配合 RPE 功能及外节结构检测。
- 测试范围
- CQ 每条件 6–11 培养室、3 次独立实验；GM 不含 RPE 每条件 3 培养室、含 RPE 每条件 9 培养室。
- 参照体系
- 不加药对照、低高剂量与有无 RPE 芯片。
- 研究结果
- CQ 20 μg/mL 的 PI 无显著变化，80 μg/mL 的 PI 及 LAMP2 增加。GM 高剂量两类芯片 PI 均增；低剂量时扣除 RPE 后的类器官信号未明显增加，不含 RPE 条件增加。
适用条件与研究局限
- GM 高剂量结果和图 8 写 2.5 mg/mL，方法段写 2 mg/mL。
- PI 为荧光强度指标，不同组织信号叠加需分区分析。
- RPE 保护或屏障贡献为模型比较提出，具体机制未单独拆分。