大鼠肝切片与人内皮细胞联用的雷公藤多苷毒性测试
用大鼠精密肝切片和人内皮细胞系构建灌流体系，比较雷公藤多苷提取物引起的损伤和胆汁酸转运变化。
用途与模型
- 研究用途
- 在保留肝组织细胞与基质的体外系统中研究提取物的短时毒性，以及与胆汁酸排泄有关的分子变化。
- 模型与细胞来源
- 大鼠精密肝切片（PCLS）与人 EA.hy926 内皮细胞系；跨物种体系。
- 方法版本
- 2026 年 PCLS/EA.hy926、251 μL/min 与 12/24 小时版本
- 实验形式
- 4 个灌流通道，每通道 6 个带 PET 膜的 MIMICup；肝切片在膜上、内皮细胞在膜下。
材料与平台
- 组织与细胞
- 5 只雌性 SD 大鼠；300 μm 厚、6 mm 直径肝切片；EA.hy926 人内皮细胞系。
- 芯片与灌流
- PC MIMICup/PET 膜、PC 通道板及 PMMA 密封层；微蠕动泵灌流 251 μL/min。
- 处理
- 雷公藤多苷提取物（TGE）15、45、135 μg/mL；0.5% DMSO 参照；12 和 24 小时终点。
测量指标与分析
- 培养循环液的肝损伤及胆汁酸指标
- 肝切片组织学评分
- 丙二醛（MDA）与谷胱甘肽（GSH）含量；超氧化物歧化酶（SOD）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性
- IL-1β、IL-4 与 TNF-α
- 法尼醇 X 受体（FXR）、多药耐药相关蛋白 2（MRP2）及胆盐输出泵（BSEP）的蛋白水平
- 内皮形态与连接标志
同一时间点比较各浓度与溶剂参照；12 和 24 小时的组织学另作时间比较，区分不同分子及检测体系的反应。
研究设计与结果
机制研究
- 研究设计
- 灌流体系暴露 TGE 的 3 个浓度，12/24 小时取循环液与组织；测量损伤、氧化应激、细胞因子及胆汁酸相关蛋白。
- 测试范围
- 5 只大鼠分别提供组织学、IHC、氧化应激、ELISA、Western blot 的切片；论文以肝切片为实验单位，各终点的切片数不代表独立动物数。
- 参照体系
- 3 个 TGE 浓度与 0.5% DMSO；同组 12 与 24 小时；内皮及组织各自标志。
- 研究结果
- 24 小时中浓度使 AST、mAST、LDH 和 TBA 升高，高浓度使 ALT 和直接胆红素升高。FXR/MRP2 降低，BSEP 在部分中高浓度降低；TNF-α 无显著变化。
适用条件与研究局限
- 这是大鼠肝切片与人内皮细胞系的混合模型，物种代谢差异限制人体毒性外推。
- 单类终点的切片来自同一动物，尚未证明不同动物或人供者间的稳定性。
- 组织学 24 小时评分高于 12 小时，但小样本的时间比较未达到统计学显著性。
- 论文材料段所测提取物中雷公藤甲素含量为 0.0979%，讨论换算采用 0.008%；实验剂量对应人体暴露的范围存在未解释的组成差异。
- 蛋白变化支持胆汁酸稳态异常的候选机制，未通过靶点干预证明完整因果链。
来源与原文
- Tripterygium Glycosides Extract-Induced Hepatic Cholestasis: A Mechanistic Study Using a Microfluidic Liver-on-a-Chip System原始研究 · International Journal of Molecular Sciences · 2026-05-06