瑞戈非尼肿瘤球的空间成像与分层蛋白分析
用 MALDI 成像追踪药物位置，用空间 SILAC 比较肿瘤球核心和外层的蛋白变化。
用途与模型
- 研究用途
- 分析三维肿瘤模型内部的药物分布及不同区域的蛋白变化。
- 模型与细胞来源
- HCT 116 人结直肠癌细胞形成球状体。
- 方法版本
- 原研究所载版本
- 实验形式
- 球体生长期间切换同位素氨基酸标记，结合药物成像及 LC-MS 蛋白质组。
材料与平台
- 球体与加药
- 起始 7000 细胞/球，生长第 4 天切换标记，第 12 天开始 9.05 μM 瑞戈非尼处理 48 小时。
- 药物与功能成像
- MALDI 成像在 6、12、24、48、72 小时追踪药物；另以半胱天冬酶 3/7 荧光比较相关细胞反应。
- 蛋白分析
- 每条件 3 个生物重复，每重复 20 球；MaxQuant/Perseus 处理，并按相同空间位置的反向标记对照归一化。
测量指标与分析
- 药物空间分布
- 半胱天冬酶 3/7 相关荧光
- 核心与外层差异蛋白
- 蛋白数据推断的通路方向
同一层内比较药物与未处理条件，再比较内外层的方向；蛋白变化与通路推断分别报告。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 同一细胞系球状体的空间分层、药物处理和反向标记比较。
- 测试范围
- 成像为 3 个球体重复；蛋白质组每条件 3 个生物重复，各 20 球。
- 参照体系
- 同层未处理球体、整体球体和反向同位素标记。
- 研究结果
- 48 小时药物到达中央；核心与外层分别 810 和 342 差异蛋白，KRAS 等在两层方向不同。
适用条件与研究局限
- 仅一个细胞系和一种药物，核心与外层可分析蛋白集合不同。
- 通路为蛋白资料推断，未证明临床耐药机制。
- 主要活性代谢物未在本次成像检出。
来源与原文
- Evaluating the Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Chemotherapeutics within a Spatial SILAC-Labeled Spheroid Model System.原始研究 · Analytical Chemistry · 2023-07-18