庞贝病心肌模型的糖基化与功能比较
比较患者与对照心肌的溶酶体、收缩、自噬和糖链测量。
用途与模型
- 研究用途
- 检验疾病表型，为后续糖基化相关干预提供指标。
- 模型与细胞来源
- 2 个庞贝病和 2 个对照的人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）来源心肌细胞系，比较蛋白加工与组织功能。
- 方法版本
- 原研究所载版本
- 实验形式
- 蛋白与质谱检测、显微成像及工程心肌恒长测力。
材料与平台
- 测力
- 心肌组织培养 2 周；一组在最后 1 周统一 2.5 Hz 刺激，测归一化收缩与舒张。
- 探针比较
- 氯喹 20 μM 处理 2 天，撤药后在第 1、4、8 天观察 LC3-II；brefeldin A 500 ng/mL 处理 2 天或 100 mM 蔗糖 2 周比较 LAMP。
- 糖链
- 蛋白印迹及糖苷酶处理、等电聚焦和基质辅助激光解吸/电离（MALDI）质谱，比较 LAMP 条带及复杂 N-连接糖链。
测量指标与分析
- 酸性 α-葡萄糖苷酶活性
- 溶酶体糖原
- 归一化收缩/舒张
- LC3-II 及 LAMP1/2
- 复杂 N-连接糖链
分别比较患者与对照在基础状态和各研究探针下的蛋白加工与收缩。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 对既有患者心肌模型进行蛋白加工及功能验证。
- 测试范围
- 2 个患者和 2 个对照细胞系；自噬比较采用不同 iPSC 传代分化的 3 次重复实验。
- 参照体系
- 对照心肌及未分化细胞/成纤维细胞、相应未处理组。
- 研究结果
- 患者 LAMP 糖基化不足；统一刺激后收缩未见一致异常，另行进行的自噬试验未见持续清除障碍。
适用条件与研究局限
- 模型心肌仍处较早成熟阶段。
- 只比较有限细胞系及受测糖链。
来源与原文
- Pompe disease results in a Golgi-based glycosylation deficit in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.原始研究 · Journal of Biological Chemistry · 2014-12-08