Danon 病心肌模型的钙信号与抗氧化干预比较
在既有 LAMP2 缺失和对照心肌细胞中，比较培养条件与两种小分子干预后的钙信号和氧化应激。
用途与模型
- 研究用途
- 检验细胞成熟条件是否显现疾病表型，并观察 NACA 的功能反应。
- 模型与细胞来源
- LAMP2 缺失及对照 iPSC 来源心肌细胞。
- 方法版本
- 原研究所载实验版本
- 实验形式
- 基础培养与促进代谢成熟条件比较，结合钙成像、活性氧检测和蛋白分析。
材料与平台
- 培养和药物比较
- 改用促进代谢成熟的培养液 48 小时，比较 5 mM NACA 与 0.5 μM 雷帕霉素处理后的功能变化。
- 钙信号
- Fura-2 成像在 0.5 Hz 电刺激下记录舒张期钙、钙瞬变幅度和搏动间隔；自发钙活动另用 Fluo-4 观察。
- 氧化应激与蛋白
- CellROX 及 MitoSOX 观察细胞和线粒体活性氧；免疫印迹比较 CaMKIIδ 磷酸化。
测量指标与分析
- 舒张期钙水平
- 钙瞬变幅度
- 搏动间隔不规则性
- 细胞及线粒体活性氧
- CaMKIIδ 磷酸化
分别比较同培养条件的对照和缺失细胞，以及缺失细胞接受 NACA 或雷帕霉素后的功能和分子指标。
研究设计与结果
机制研究
- 研究设计
- 培养状态比较后，在缺失模型中测试氧化应激干预与钙信号改善。
- 测试范围
- 至少 3 次独立实验；各组钙成像 88–114 个细胞、活性氧成像 135–181 个细胞。
- 参照体系
- 相同培养条件的对照细胞、未干预的缺失细胞和雷帕霉素条件。
- 研究结果
- NACA 降低氧化应激及 CaMKIIδ 磷酸化并改善钙信号；雷帕霉素未显示相同功能改善。
适用条件与研究局限
- 观察在单细胞层面，未包含组织内电传导、纤维化及细胞间相互作用。
- 模型是既有基因缺失细胞，未进行患者药物疗效验证。