NAMs新方法学前沿

BASiC 单心肌细胞收缩与电生理联合分析

以图像相似性获得收缩曲线,结合柔性基底模型估算收缩力,并同步记录钙信号或膜电位。

用途与模型

研究用途
比较药物对收缩动力学与兴奋—收缩耦联的影响。
模型与细胞来源
人胚胎干细胞来源心肌细胞;方法比较另包含成年小鼠心肌和细胞簇。
方法版本
原研究所载版本
实验形式
柔性 PDMS 上的单细胞显微视频,兼容荧光钙/膜电位通道。

材料与平台

视频与药物
至少 100 帧/秒;维拉帕米和异丙肾上腺素 10/100 nM,1.2 Hz 刺激,每次处理 5 分钟后记录至少 5 次收缩。
曲线与力学
舒张期帧构成基线,以细胞尺寸校准相对长度;5 kPa 基底性质和细胞尺寸进入收缩力模型。
联合功能
Fluo-4 记录钙瞬变,FluoVolt 记录动作电位;多非利特采用 10 nM,并分别分析间隔和峰幅变异。

测量指标与分析

  • 相对长度与缩短/恢复速度
  • 峰值收缩力估计
  • 钙瞬变幅度
  • 动作电位与收缩间隔/峰值变异

同一细胞前后比较;至少 5 次收缩对齐平均,另与手工长度和荧光微珠牵引力测量比较。

研究设计与结果

药物集评价

研究设计
机械图像测量与传统长度/牵引力参照比较,并用 3 种药物测试功能反应。
测试范围
维拉帕米 8 细胞、异丙肾上腺素 9 细胞、多非利特 10 细胞,各来自 3 次独立实验。
参照体系
同一细胞基础状态、手工长度和荧光微珠测力。
研究结果
杆状细胞长度曲线相关约 0.98、两种力曲线相关约 0.96;多非利特部分异常仅在收缩曲线明显。

适用条件与研究局限

  • 力计算依赖尺寸、基底性质和力学假设。
  • 不规则细胞峰值力比例偏差较大。
  • 当前流程离线分析视频,未提供实时计算。

来源与原文

  1. Integrated Analysis of Contractile Kinetics, Force Generation, and Electrical Activity in Single Human Stem Cell-Derived Cardiomyocytes.原始研究 · Stem Cell Reports · 2015-11-25

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