NAMs新方法学前沿

胰腺癌三共培养药物反应与促管形成检测

用 4 种胰腺癌三共培养球状体检测吉西他滨单药和与紫杉醇联用的整体活力,再评价未处理球状体分泌物的血管内皮生长因子(VEGF)和内皮管形成。

用途与模型

研究用途
比较细胞组成对药物反应及促血管形成分泌作用的影响。
模型与细胞来源
MiaPaCa-2 或 BxPC-3 癌细胞,与 RLT-PSC 或 hPSC21 星状细胞及皮肤微血管内皮 HMEC-1 组合;均为细胞系。
方法版本
2025 年两癌细胞/两星状细胞及 HMEC-1 4 组合版本
实验形式
三共培养与单癌细胞球状体比较;ATP 剂量曲线、分泌物免疫检测及 6 小时内皮管状网络成像。

材料与平台

球状体组合
按各组合调整比例和总细胞数,在 MCDB131 中形成 3 天;种入比例与培养后比例分别测量。
药物检测
吉西他滨 2.5 nM–10 µM,单药及联用紫杉醇,处理 5 天;ATP 发光检测整个共培养的活力。
分泌物
未给药球状体培养液的 VEGF 免疫检测;培养液加入 HMEC-1 后 6 小时测量网络。
网络指标
管状结构长度、环路、分支与面积;与完整培养液参照比较。

测量指标与分析

  • 共培养总体 ATP 活力
  • 活力—剂量曲线下面积
  • 培养液 VEGF 浓度
  • 内皮管状网络的长度、环路和分支

比较单癌细胞与三共培养及星状细胞来源差异;曲线下面积表示活力剂量反应,VEGF 和管形成作为独立分泌/功能结果。

研究设计与结果

实验条件比较

研究设计
4 种三共培养组合与单癌细胞药物反应,以及其未处理培养液对内皮的影响。
测试范围
药物曲线至少 7 个样本来自 3 次独立实验;VEGF 为 1 次实验内 3 重复;管形成至少 8 个样本来自 3 次独立实验。
参照体系
单癌细胞球状体、不同星状细胞组合及管形成培养液参照。
研究结果
BxPC-3 单独培养比三共培养更耐受;不同星状细胞组合也改变药物反应。培养液产生不同促管形成网络,VEGF 相近时仍可出现网络差异。

适用条件与研究局限

  • ATP 包含不同细胞类型的贡献,不是癌细胞特异死亡率。
  • 联用配比在实验描述与图 3 图注有不同记载。
  • 模型没有免疫细胞,内皮来自皮肤;管状网络未灌流,且未直接测试抗血管生成药物。

来源与原文

  1. Capturing the Heterogeneity of the PDAC Tumor Microenvironment: Novel Triple Co-Culture Spheroids for Drug Screening and Angiogenic Evaluation原始研究 · Cells · 2025-03-18

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