患者 iPSC-RPE 既有玻璃膜疣样沉积的药理评价
在人源 RPE 单层的基底侧沉积中比较活性 MMP2、RAGE 拮抗肽与 sPLA2-IIA 抑制剂。
用途与模型
- 研究用途
- 用患者相关病理指标评价降低上皮下脂质-蛋白沉积的候选作用。
- 模型与细胞来源
- 患者 iPSC 分化的 RPE 单层，SFD/DHRD/AMD；平行培养年龄匹配对照。
- 方法版本
- 2024 年≥90 天 SFD/DHRD/AMD 主图 5–6 版本
- 实验形式
- Transwell 或 24 孔 RPE 培养；共聚焦共定位与 Fiji 沉积物计数/面积。
材料与平台
- 培养对象
- 患者 RPE 成熟并长期培养至约 90 天或更久；本版本针对已有沉积物，非健康细胞诱导阶段。
- 3 种处理
- 活性 MMP2 基底侧 150 nM / 18 h；RAP 顶侧 5 μM 每日 14 d；LY315920 顶侧 5 μM 每日 7 d。
- 沉积判定
- 共定位 APOE/TIMP3 或 APOE/sPLA2-IIA/脂质标志；分别统计数量/面积，与未补充比较。
测量指标与分析
- 共定位玻璃膜疣样沉积物数量
- 沉积物面积
- 配套 RPE 屏障与细胞状态
Fiji 最大投影、阈值及对象计数；每实验 5–6 视野，至少 3 独立实验/生物重复；图 5–6 每组 3 生物重复，不作供者数。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- ≥90 天患者 RPE 未处理与三类干预分别比较，主图覆盖 SFD/DHRD/AMD。
- 测试范围
- 图 5–6 各疾病处理 n=3 生物重复；整研究细胞系/克隆范围与每图分母分开。
- 参照体系
- 同培养年龄的未补充患者 RPE，分别对应蛋白/脂质共定位组合。
- 研究结果
- MMP2、RAP 与 LY315920 在上述患者模型中均减少相应沉积物数量及面积。
适用条件与研究局限
- 形成期多西环素实验与既有沉积物干预采用不同处理时程。
- 沉积物共定位、细胞屏障和存活指标分别评价。
来源与原文
- Human iPSC-based disease modeling studies identify a common mechanistic defect and potential therapies for AMD and related macular dystrophies原始研究 · Developmental Cell · 2024-10-02