胰腺癌类器官与 CAR-T 共培养的连续成像评价
用患者来源胰腺癌类器官与健康供者 CAR-T 共培养，连续测量类器官数量、面积及周围 T 细胞分布，并以流式细胞术和共聚焦成像比较。
用途与模型
- 研究用途
- 评价短期抗原依赖性免疫杀伤的时间变化，以及患者来源模型之间的反应差异。
- 模型与细胞来源
- 7 位胰腺导管腺癌患者手术组织建立的类器官；CAR-T 来自健康供者，主要比较涉及 3 位独立 T 细胞供者。
- 方法版本
- 2026 年 CD318/TSPAN8 靶向免疫共培养的既有 OrganoIDNet 应用
- 实验形式
- Matrigel 三维共培养、连续明场成像与既有 OrganoIDNet 推理分析；终点流式与共聚焦检测互相补充。
材料与平台
- 患者来源胰腺癌类器官
- CD318 表达存在差异的患者模型；另以 TSPAN8 阳性及未检出表达的类器官比较抗原依赖性。
- 免疫细胞与对照
- 靶向 CD318 或 TSPAN8 的 CAR-T；未转导 T 细胞、无 T 细胞类器官及相应抗原缺失细胞系作为不同层面的对照。
- 图像与分析工具
- Incucyte 连续明场图像，使用已发表 OrganoIDNet 预训练分割模型；本研究没有重新训练或重新验证该算法。
测量指标与分析
- 单个类器官数量与二维面积
- 类器官外侧邻近范围的 T 细胞分布
- 终点活肿瘤细胞比例
- CD69 与 TIM-3 等 T 细胞表型
- 共聚焦图像中的细胞接触
连续形态测量按起始状态归一化；主要测试的 CAR-T:肿瘤细胞比例为 2:1、5:1、8:1。邻近分析描述空间接近，终点流式检测另评估存活和表型；技术孔先合并，再按独立供者比较。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 在同一患者模型中比较 CAR-T、未转导 T 细胞和无 T 细胞条件，并观察不同效靶比下的时间变化。
- 测试范围
- 7 位患者来源类器官组成的研究面板；其中 PDO1/2 有主要详细时序与流式比较，主要免疫实验涉及 3 位健康 T 细胞供者；样本和技术孔层级分别保留。
- 参照体系
- 各患者模型对应对照、抗原阳性/缺失细胞系，以及 TSPAN8 阳性/未检出表达类器官。
- 研究结果
- 主要模型中 CAR-318 的终点杀伤随效靶比提高而增强；连续图像显示数量、面积与反应时间差异，其他患者模型的反应幅度不一；邻近 T 细胞计数比较在 PDO1 中显著，在 PDO2 中未达到显著性。
适用条件与研究局限
- 约 2 天的连续成像与 3 天流式终点分别解释，不能评价长期持续性或耗竭。
- 二维面积和邻近统计不直接等同活细胞数或组织浸润。
- 基质与操作差异仍需更多重复性验证，健康供者免疫细胞不代表患者自身免疫功能。