中脑类器官的 α-突触核蛋白纤维摄取与 Tilorone 测试
在外加纤维诱导的模型中，以成像和免疫印迹比较药物反应。
用途与模型
- 研究用途
- 研究候选药物对 α-突触核蛋白纤维摄取、磷酸化和凋亡相关变化的影响。
- 模型与细胞来源
- 人源 iPSC 中脑类器官，在分化第 60 天开始处理；另设小鼠原代神经元实验。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- Aggrewell 聚集后在超低吸附孔板摇动分化，12 孔板给药。
材料与平台
- 分化与尺寸控制
- iPSC 解离后 Aggrewell 每孔接种 3×10⁶ 个细胞，中脑分化培养液加 5 µM Y-27632；聚集体转入超低吸附 6 孔板，120 rpm 摇动。第 18 天起加 0.5 µM AraC 14 天，控制进一步增大。
- 纤维与给药顺序
- 第 60 天转入 12 孔板；Tilorone 0、0.5、2、4 µM 提前 30 分钟加入，再加 200 nM 预形成 α-突触核蛋白纤维。48 小时后改为只含药物的培养液，继续 14 天，每隔 1 天换液，120 rpm 摇动。
- 检测与对照
- 未处理、纤维加 DMSO、纤维加药物分别比较。4% PFA 固定切片，检测荧光纤维、TH 和 caspase-3；Nikon CSU-W1 SoRa 成像，Imaris/Fiji 分析。模型蛋白免疫印迹检测 Ser129 磷酸化 α-突触核蛋白、总蛋白与 HSC70。
测量指标与分析
- 纤维斑点强度/体积
- 每视野纤维斑点数
- caspase-3 荧光强度
- Ser129 磷酸化 α-突触核蛋白
成像指标与纤维加 DMSO 条件比较，免疫印迹检测磷酸化与总 α-突触核蛋白；不同实验条件分别报告。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 外加纤维与给药条件的组织成像和免疫印迹比较。
- 测试范围
- 纤维摄取成像定量的原图注标注 n = 2。
- 参照体系
- 未处理模型、纤维加 DMSO 模型和纤维加 Tilorone 模型。
- 研究结果
- 给药后内部纤维斑点数、纤维信号及 caspase-3 信号降低；0.5 µM 条件下 Ser129 磷酸化降低较明显。
适用条件与研究局限
- 图 3C 图注列 0.5 及 1 µM，实际图标为 0.5 及 2 µM，方法列 0/0.5/2/4 µM，原件浓度表述存在差异。
- 未开展患者治疗反应对应或长期体内安全性验证。
来源与原文
- Tilorone mitigates the propagation of α-synucleinopathy in a midbrain-like organoid model原始研究 · Journal of Translational Medicine · 2024-09-02