琼脂糖微孔内肺癌类器官与成纤维细胞上清药物测试
通过琼脂糖微孔和不同上清培养条件测量肺癌模型的靶向药反应。
用途与模型
- 研究用途
- 研究成纤维细胞分泌物对 KRAS G12C 肺癌模型药物反应的影响。
- 模型与细胞来源
- F231、F671 患者来源类器官；辅助使用 NCI-H358、A549 细胞球，WI-38 和患者肿瘤相关成纤维细胞上清。
- 方法版本
- 原研究首次发表版本
- 实验形式
- 200 µm 直径、75 µm 深琼脂糖微孔；24 孔板约 400 个微孔/孔、48 孔板约 150 个微孔/孔。
材料与平台
- 模型装载
- 48 孔板每孔 300 µL 悬液、约 150 个类器官，过夜均匀落入约 150 个微孔；F231/F671 由 BME2 培养物释放后使用。
- 药物处理
- PDO 先在普通培养液中培养 1 天，再用普通培养液、WI-38 或 CAF 上清加入 500 nM 阿达格拉西布处理 72 小时。
- 活力与尺寸
- calcein AM、碘化丙啶、Hoechst 各 3 µg/mL，37 °C 染色 30 分钟；采集 5 层 z-stack，以 calcein 面积/活死染色总面积计算活力，并记录最大截面面积。
- 上清制备
- WI-38 达到完全汇合后维持 2 天收集上清；患者 CAF 由肿瘤组织消化和培养获得。
测量指标与分析
- 染色面积活力指标
- 球体最大截面面积
- 尺寸变异系数
- 辅助 Ki-67 与 ERK 磷酸化
- 辅助 ATP 信号
各培养条件设无药与加药组；PDO 反应采用培养条件和药物的双因素方差分析。细胞系信号实验与患者类器官反应分别报告。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 2 个 KRAS G12C PDO 在普通培养液、WI-38 上清及 CAF 上清中接受同一阿达格拉西布暴露。
- 测试范围
- F231 与 F671；500 nM、72 小时；各条件图像测量数量不同。
- 参照体系
- 同一模型普通培养液及相应无药条件。
- 研究结果
- F671 染色活力指标由 69.6% 提高至 80.2% 或 87.8%；F231 由 45.3% 提高至 60.6% 或 71.1%。
适用条件与研究局限
- 直接混合共培养的活力指标同时包括肿瘤细胞和成纤维细胞。
- ERK/MET 机制实验主要使用 NCI-H358，未在供者患者中检验药物疗效预测。
- PDO 仅 2 个，长期培养第 3 周活力和尺寸下降。